ニワトリを介したキジ目鳥類の個体復元

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13460132
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 小野 珠乙 信州大学, 農学部, 教授 (10177264)
• 研究分担者: 鏡味 裕 信州大学, 農学部, 助教授 (80308303)
• キーワード: ウズラ / ヒメウズラ / ニワトリ / 胚発生 / 始原生殖細胞 / キメラ / PCR / in situハイブリダイゼーション

研究概要

鳥類における希少種のレスキュー、希少品種の大量生産、保存を念頭におき、始原生殖細胞(PGCs)移植により、キジ目鳥類の個体復元を目指した。遺伝的に異なった2種以上の細胞集団より形成されるキメラ動物において外来細胞と内在細胞の識別のため、種によるDNA塩基配列の違いに着目し、PCRおよびin situハイブリダイゼーションを用いた分子生物学的手法により細胞識別を試み、ニワトリ、ウズラ、ヒメウズラのDNA配列の違いをPCR、in situハイブリダイゼーションにより識別する方法を確立した。フイコール密度勾配遠心分離法に改良を加え、従来より2倍良好にドナーPGCsを精製する方法を開発した。軟X線照射によりレシピエントの生殖細胞増殖を正常動物の約1/5に減弱させる方法を開発し、ドナー由来のPGCsがレシピエント内在のPGCsと競合したレシピェント生殖腺への移動・定住の機会を増大させることができた。ニワトリ・ウズラ間のPGCs移植によるキメラを作出し、その成体となったキメラオスの精液からドナー由来のDNAが検出できた。ニワトリPGCsをウズラに導入したキメラメスにニワトリ精液を人工授精したところ、通常の黄と黒の縞模様のウズラ型羽毛ではなく、全身薄い黄色のニワトリ型ヒナが生まれた。しかし、DNA鑑定の結果ドナー由来の純粋ニワトリではなく、ニワトリとウズラの雑種であった。また、烏骨鶏PGCsを白色レグホンに導入したキメラは現在育成および後代検定試験中である。

研究成果

• [文献書誌] Ono, T., Li, HC.: "Restriction of proliferation of primordial germ cells by the irradiation of Japanese quail embryos with soft X-rays"Comparative Biochemistry and Physiology Part A. 130. 133-140 (2001)
• [文献書誌] Ono, T.: "Ex Ovo Culture of Quail Embryos and its Application for Embryo Manipulation"Animal Science Journal. 72(5). 361-371 (2001)
• [文献書誌] Ono, T., Li, HC.: "Identification of transferred chicken germ cells in quail gonad and semen by amplification of chicken-specific PCR products"Journal of Poultry Science. 38(4). 308-316 (2001)
• [文献書誌] Kagami, H.: "Developmental genetic analysis of avian primordial germ cells and the application to poultry biotechnology"2001 Symposium proceeding of Korean Society of Poultry Science. 27-34 (2001)
• [文献書誌] Ono, T.: "Development of complete culture system for quail embryos and its application for embryo manipulation"2001 Symposium proceeding of Korean Society of Poultry Science. 47-55 (2001)
• [文献書誌] Kagami, H.: "Strain preference in donor and recipient for production of W-bearing sperm in mixed-sex germline chimeric chickens"Comparative Biochemistry and Physiology Part A. 131(2). 287-292 (2002)