新規高分子量G蛋白質と結合分子群の機能協関および細胞内局在の動態

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470007
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 久保 義弘 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (80211887)
• キーワード: GTP結合蛋白質 / CDNA / dynamin / 細胞内局在 / ミトコンドリア

研究概要

我々がマウス脳の神経細胞において高発現していることを明らかにした新規高分子量G蛋自質(mOPA1)は、そのヒトにおける相同遺伝子の欠損により遺伝性の視神経萎縮症が引き起こされることから、神経細胞の生存、維持に関する機能を果たしていることが示唆される。本課題においてはmOPAlTの果たす機能について、培養細胞を用いた発現系を用いて解析を行った。mOPA1はN末端にミトコンドリア輸送シグナルを有しており、遺伝子導入したCOS-7細胞内においてミトコンドリアに局在する。mOPA1が過剰発現することにより、Tube状の形態をしているCOS-7細胞のミトコンドリアは断片化し、小さな棒状もしくはリング状の形態に変化した。mOPA1のミトコンドリア内における局在をミトコンドリアの膜間部分およびマトリックスのマーカーとともに同時に観察したところ、小さなリング状になったマトリックスの一端に、mOPA1および膜間部分マーカーがVesicle状の局在を示している様子が認められた。さらに免疫電顕による解析により、mOPA1を発現する細胞においてはミトコンドリア内膜にあるべき特徴的なひだ(クリステ)構造が消失し、凝集して片寄った分布をしている膜間部分にmOPA1が局在していることが判明した。以上得られた結果より,mOPA1は遺伝子導入した細胞内においてミトコンドリア膜間部分に局在し、ミトコンドリア内膜に何らかの作用を与えることによりミトコンドリア全体の形態に影響を与え、ミトコンドリア断片化を導いていることが示唆された。他の何らかの蛋白質との相互作用により、その機能が修飾・制御される可能性も考えられるので、マウス脳よりmOPA1をbaitとして用いたtwo-hybrid法スクリーニングによって得られたクローンとの共発現によりmOPA1の機能が変化するかどうかについて、今後解析を行う。

研究成果

• [文献書誌] Misaka, T., Miyashita, T., Kubo, Y.: "Primary Structure of a dynamin-related mouse mitochondrial GTPase and its distribution in brain subcullular locallization ane effect on mitochondorial morphology"Journal of Biological Chemistry. 277. 15834-15842 (2002)
• [文献書誌] Ai, T., Fujiwara, Y., Tsuji, K., Otani, H., Nakano, S., Kubo, Y., Horie, M.: "Noel KCNJ2 mutation in familial periodic paralysis with ventricular dysrhythmia"Circulation. 105. 2592-2594 (2002)
• [文献書誌] Saitoh, O., Murata, Y., Odagiri, M., Itoh, H., Misaka, T., Kubo, Y.: "Alternative splicing of RGS8 gene determines inhibitory function of receptor-type-spencific G9 signaling"Proceedings of National Academy of Sciences USA. 99. 10138-10143 (2002)
• [文献書誌] Murata, Y., Fujiwara, Y., Kubo, Y.: "Identification of a site involved in the block by extracellular Mg^<2+> and Ma^<2+> aswell as permeation of K^+Kir2.1K^+ channel"Journal of Physiology. 544. 665-677 (2002)
• [文献書誌] Fujiwara, Y., Kubo, Y.: "Ser 165 in the second transmembrane region of the Kir2.1 channel determines its susceptibility to blocked by intracellular Mg^<2+>"Journal of General Physiology. 120. 677-692 (2002)
• [文献書誌] Abe, H., Misaka, T., Tateyama, M., Kubo, Y.: "Effects of co-expression with Homer isoforums on the function of metabotropic glutamate receptor1α"Molecular and Cellular Neuroscience. (in press). (2003)