血管内皮にのみ存在する膜型コレクチンのスカベンジャー機能を解析する。

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470139
• 研究機関: 旭川医科大学
• 研究代表者: 若宮 伸隆 旭川医科大学, 医学部, 教授 (20210867)
• 研究分担者: 福澤 純 旭川医科大学, 医学部, 助手 (40333695) ; 小笠原 正洋 旭川医科大学, 医学部, 助手 (40185492) ; 吉田 逸朗 旭川医科大学, 医学部, 助教授 (20041816) ; 鈴木 定彦 鳥取大学, 医学部, 助教授 (90206540)
• キーワード: コレクチン / レクチン / 動脈硬化 / スカベンジャー受容体 / 補体 / 微生物

研究概要

平成13〜15年度の研究成果としては以下の如く、7つのプロジェクトがめざましく進展した。
(1)血管内皮細胞存在型コレクチン遺伝子CL-P1の遺伝子クローニングが終了した。
1.ヒトCL-P1cDNAのクローニング
2.マウスCL-P1cDNAのクローニング
3.ラットCL-P1cDNAのクローニング
4.アフリカツメガエルCL-P1cDNAのクローニング
5.ゼブラフィッシュCL-P1cDNAのクローニング
6.遺伝子ターゲッティング用マウスCL-P1ゲノムDNAのクローニング
7.ヒトCL-P1ゲノムDNAのクローニング
(2)ヒト、ゼブラフィッシュCL-P1遺伝子永久発現細胞株の樹立
1.永久発現株細胞の樹立・発現レベルの異なる株を得た。
2.部分遺伝子発現細胞株の樹立を行った。
(3)分泌型CL-P1作成とその欠損や点変異蛋白質の作成
1.分泌型CL-P1の発現系の探索
2.上記の発現系を用いて、コラーゲン部分、レクチン部分、coiled coil部分の機能ドメイン欠損蛋白質の作成
3.分泌型蛋白に結合実験のためのELISAシステムの樹立
(4)CL-P1細胞内領域に結合する蛋白質の探索
1.酵母two hybridシステムを用いた結合タンパク質のクローニング
2.クローニングしたAP2M2蛋白とCL-P1蛋白の結合実験
(5)酸化の異なる変性LDLの作成とその解析
(6)コレクチン発現誘導にかかるpromoter解析
(7)ヒト血管内皮細胞の正常細胞株であるHUVECにおける常在型CL-P1の発現誘導の検討
本研究の大きな目標としては、CL-P1遺伝子ノックアウトマウスを用いた種々の個体レベルの研究を行うことであるが、そのための基礎実験をこの3年間で蓄積する事が非常に重要であると捉えている。まず細胞レベルの遺伝子発現株を用いた研究により、受容体の機能解析を中心に行い、また正常発現細胞株HUVECでの発現誘導の発見があり、常在型でありなから特殊な環境では、著しくその発現が増強する事実も明らかになった。本研究は現在やっと基礎研究の土台が整った段階であり、個体レベルのCL-P1のスカベンジャー機能解析への展開に続いていくと考えている。

研究成果

• [文献書誌] Kawai, T., Suzuki, Y., Eda, S., Kase, T., Ohtani, K., Sakai, Y., Keshi, H., Fukuoh, A., Sakamoto, T., Nozaki, M., Copeland, N.G., Jenkins, N.A., Wakamiya, N: "Molecular cloning of a mouse collectin liver 1"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 66(10). 2134-2145 (2002)
• [文献書誌] 鈴木定彦, 若宮伸隆: "MBL(mannan-binding lectin)その機能と生理学的意義"中国四国支部会誌. 17. 2-12 (2002)
• [文献書誌] Ohmori, H., Makita, Y., Funamizu, M., Chiba, S., Ohtani, K., Suzuki, Y., Wakamiya, N., Hata, A: "Haplotype analysis of human collectin placenta 1(hCL-P1) gene"J.Hum.Genet. 48(2). 82-85 (2003)
• [文献書誌] Suzutani T, Ishioka K, De Clercq E, Ishibashi K, Kaneko H, Kira T, Hashimoto KI, Ogasawara M, Ohtani K, Wakamiya N, Saijo M.: "Differential Mutation Patterns in Thymidine Kinase and DNA Polymerase Genes of Herpes Simplex Virus Type 1 Clones Passaged in the Presence of Acyclovir or Penciclovir"Antimicrob Agents Chemother. 47(5). 1707-1713 (2003)
• [文献書誌] Saito, T., Fukuzawa, J., Osaki, J., Sakuragi, H., Yao, N., Haneda, T., Fujino, T., Wakamiya, N., Kikuchi, K., Hasebe, N: "Roles of calcineurin and calcium/calmodulin-dependent protein kinase II in pressure overload-induced cardiac hypertrophy"J.Molecular and Cellular Cardiology. 35(9). 1153-1160 (2003)
• [文献書誌] 若宮伸隆, 吉田逸朗, 小笠原正洋, 福澤純, 大谷克城, 小山聡: "生体防御レクチンとしてのコレクチンファミリー"北海道医学雑誌. 79(1). 3-7 (2004)
• [文献書誌] 鈴木定彦, 若宮伸隆: "Annual Review免疫"感染防御とコレクチンファミリー。. 217-225 (2002)