1p36のBACコンティグを用いた神経芽腫の癌抑制遺伝子の探索とその臨床応用

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470156
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 川口 裕之 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (00313130)
• 研究分担者: 井田 孔明 東京大学, 医学部附属病院, 助手 (60313128) ; 林 泰秀 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (30238133) ; 滝田 順子 東京大学, 医学部附属病院, 助手 ; 小林 美由紀 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (60205391)
• キーワード: neuroblastoma / 1p36欠失 / KIFIB gene / DFF45 / 癌抑制遺伝子 / PEX 14 / BACコンティング / Charcot-Marie Tooth disease type 2

研究概要

神経芽腫において1番染色体短腕(1p)のp35-36領域をカバーするBACコンティグにより、神経芽腫25細胞株中1株(NB-1)にホモ欠失領域を同定し、7個の既知の遺伝子(E4,KIF1B, SCYA5, PGD, Cortistatin, DFF45, PEX14)を同定した。これらの遺伝子のうちキネシンfamilyであるKIF1B-β遺伝子のcDNAとexon-intron配列を決定した。この遺伝子は一部の神経芽腫の新鮮腫瘍で発現の低下がみられた。またpolymerase chain reaction (PCR)-single strand conformation polymorphism (SSCP)による変異解析ではframe shift mutationはみられず、ヘテロ接合体欠失(LOH)は16例中6例(38%)にみられたが、KIF1B-β遺伝子は神経芽腫の候補癌抑制遺伝子の可能性は低いと考えられた。さらCharcot-Marie-Tooth disease 2A型(CMT2A)の患者検体にてmissense mutationを検出し、ヘテロ欠失マウスの検討によりこの遺伝子がCMT2Aの原因遺伝子であることをみいだした。さらにKIF1B-α遺伝子を単離し、神経芽腫で検討したが、frame shift mutationはみられず、神経芽腫の原因遺伝子ではないことを明らかにした。NB-1株でホモ欠失がみられたDFF45は、神経芽腫において発現の減弱や変異はみられず、alternative splicingによると思われる多数のisofomがみられ、一部のisoformは腫瘍のみにみられるものもあったが、DFF45遺伝子は神経芽腫の癌抑制遺伝子の可能性は低いと思われた。さらに今年度は1p36に座位するcaspase 9遺伝子の検討を行ったが、frame shift mutationはみられず、神経芽腫の原因遺伝子ではないと思われた。さらにDNA Chipを用いて神経芽腫の進展例と早期例で発現プロファイルの検討を行い、進展例、早期例で発現の増加している遺伝子、減少している遺伝子をみいだした。現在real-time PCR法による定量で発現を確認し、その意義を検討しているところである。

研究成果

• [文献書誌] Taketani T: "The HOXD11 gene is fused to the NUP98 gene in acute myeloid leukemia with the t(2;11)(q31;p15)"Cancer Res. 62. 33-37 (2002)
• [文献書誌] Ono R: "SEPTIN6, a Human Homologue to Mouse Septin6, Is Fused to MLL in Infant Acute Myeloid Leukemia with Complex Chromosomal Abnormalities Involving 11q23 and Xq24"Cancer Res. 62. 333-337 (2002)
• [文献書誌] Uno K: "Aberrations of the hSNF5/INI1 gene are restricted to malignant rhabdoid tumors or atypical teratoid/rhabdoid tumors in pediatric solid tumors"Genes Chromosomes Cancer. 34. 33-41 (2002)
• [文献書誌] Taketani T: "The t(7;11)(p15;p15) in acute myeloid leukemia results in fusion of the NUP98 gene with a HOXA cluster gene, HOXA13, but not HOXA9"Genes Chromosomes Cancer. 34. 437-443 (2002)
• [文献書誌] Ono R: "LCX, leukemia-associated protein with a CXXC domain, is fused to MLL in acute myeloid leukemia with trilineage dysplasia having t(10;11)(q22;q23)"Cancer Res. 62. 4075-4080 (2002)
• [文献書誌] Taketani T: "Novel NUP98-HOXC11 Fusion Gene Resulted from a Chromosomal Break within Exon 1 of HOXC11 in Acute Myeloid Leukemia with t(11;12)(p15;q13)"Cancer Res. 62. 4571-4574 (2002)