DNA切断・修復機能異常による疾患の病態解明

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470158
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 水谷 修紀 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (60126175)
• 研究分担者: 森尾 友宏 東京医科歯科大学, 医学部・附属病院, 助教授 (30239628) ; 野々山 恵章 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (40280961)
• キーワード: ATM / フレームシフト / がん体質 / トポイソメラーゼ / AID / クラススイッチ / Ku

研究概要

ヒトAIDをAIDノックアウトマウスのB細胞に導入したところ、正常AIDではクラススイッチを誘導できたが、高IgM症候群II型患者由来AIDではクラススイッチを起こせなかった.CD40+IL4刺激により患者B細胞では、DNA切断による環状DNAが検出されず、IgMクラススイッチを起こせなかった.このことからAIDはクラススイッチに不可欠な役割を果たすこと、DNA切断段階で機能していることが示された
毛細血管拡張性小脳失調症の原因遺伝子ATMの遺伝子以上検出のための大規模スクリーニングアッセイ法を酵母の栄養要求性を利用して開発し、論文を発表した(R. Tsuchida et al. Radiation Res印刷中)。小児腫瘍性疾患の遺伝的背景要因としてのATM異常の関与を明らかにする目的で小児ホジキン病、乳児白血病患者などの正常体細胞の解析を行い、前者で6/15,後者で2/8の頻度で遺伝子異常が存在することを明らかにした。ATMがトポイソメラーゼIIαと結合し、そのC端末をリン酸化することを見いだした。このリン酸化によってトポイソメラーゼ IIαの蛋白としての寿命に影響があると考えられた。
Kuの遺伝子発現調節機能を検討した。2種類のKu80ドミナントネガティブコンストラクトをEGFPとの融合タンパクの形で作成し、B細胞株に遺伝子導入してから、IL-4と抗CD40抗体で刺激したところ、C末端を欠くコンストラクトを導入した細胞株ではCD23の発現が抑制された。さらに、レポーター遺伝子アッセイによる解析で、Kuが会合するとされるエンハンサー領域は、その周辺部が存在することにより機能し、IL-4R/CD40刺激で最大限の発現が得られることが判明した。これらの結果はKuがB細胞において、CD23発現を調整している間接的な証左と考え、さらに検討を加えている。

研究成果

• [文献書誌] R.Tsuchida, S.Mizutani, et al.: "Detection of ATM Gene Mutation in Human Glioma Cell Line M059J by a Rapid Frame-Shift/Stop Codon Assay in Yeast."Rad. Res. (印刷中).
• [文献書誌] H.Kawasaki, S.Mizutani, et al.: "Superior outcome of infant acute myeloid leukemia with intensive chemotherapy : results of the Japan Infant Leukemia Study Group"Blood. 98. 3589-3594 (2001)
• [文献書誌] G.Buscemi, S.Mizutani, et al.: "Chk2 Activation Dependence on Nbsl after DNA Damage"Molecular and Cellular Biology. 21. 5214-5222 (2001)
• [文献書誌] F.Alexander, S.Mizutani, et al.: "Transplacental Chemical Exposure and Risk of Intant Leukemia with MLL Gene Fusion"Cancer Res. 61. 2542-2546 (2001)
• [文献書誌] Nonoyama, S., HD Ochs.: "Wiskott-Aldrich syndrome"Current Allergy and Asthma Reports.. 1. 430-437 (2001)
• [文献書誌] Jo BK, S.Nonoyama, et al.: "Characterization of mutations, including a novel regulatory defect in the first intron, in Bruton's tyrosine kinase gene from seven Korean XLA families"J. Immunol.. 167. 4038-4045 (2001)