腎糸球体上皮細胞障害による蛋白尿発現機序の解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470210
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 清水 不二雄 新潟大学, 医学部, 教授 (40012728)
• 研究分担者: 矢尾板 永信 新潟大学, 医学部, 助教授 (00157950) ; 河内 裕 新潟大学, 医学部, 助教授 (60242400)
• キーワード: 蛋白尿 / 糸球体上皮細胞 / スリット膜 / ネフリン / ネフローゼ症候群

研究概要

腎糸球体上皮細胞足突起間スリット膜(SM)構成各分子(ネフリン、ZO-1、FAT)に対する特異抗体は、ネフリンについては細胞内局在部位中21個のアミノ酸からなるペプチド部分に対するウサギ抗体を、またFATについてはC末端近くの20個のアミノ酸からなるペプチドに対する同じくウサギ抗体を作成した。このFAT細胞内部位に対する特異抗体と、ネフリン細胞外部位認識単クローン抗体(mAb)5-1-6とを用いた二重免疫電顕法(5, 10nm径金コロイド粒子の併用)により、両者が共にSM底部で糸球体上皮細胞(足突起)細胞内(抗FAT抗体)外(mAb 5-1-6)に局在することが明らかとなった。また市販の抗ZO-1 mAbと上記抗FAT抗体による二重免疫電顕法では、両抗体に由来する二種の径の金コロイド粒子が共々SMに面した細胞質内に局在していることも判明した。
腎糸球体障害モデルとして抗SM mAb 5-1-6静注により5-1-6腎症を、Puromycin Aminonucleoside静注によるPAN腎症を、また抗Fx1A抗体静注により受身Heymann腎炎を各々ラットに惹起して各構成分子の動態を検索した。ネフリンの蛋白レベル、mRNAレベルとも、5-1-6腎症、PAN腎症にて蛋白尿発現以前の極早期にその発現が砥下していることが明らかとなった。また前者モデルでネフリン局在の量的質的変化に関連してZO-1の発現低下とその局在変化が再確認された。これら蛋白尿惹起モデルにおけるSM構成3分子の動態検索は、3分子局在の近接性に加えて機能的にも相互に密接に関連しあってSMの構造・機能の維持に重要な役割を演じていることを明らかにしつつある。極最近明らかにされたSM関連分子(ポドシン、CD2AP)も加えた統合的な検索が来年度に向けて進行中である。

研究成果

• [文献書誌] Morioka Y: "Podocyte injuries exacerbate mesangial proliferative glomeruloncphritis"Kidney Int. 60. 2192-2204 (2001)
• [文献書誌] Ito Y: "Not the ED1^+ but the ED3^+ macrophage participates in the pathogenesis of irreversible glomerular changes"Acta Medica et Biologica. 49. 73-80 (2001)
• [文献書誌] Ostendorf T: "Specific antagonism of PDGF prevents renal scarring in experimental glomerulonephritis"J Am Soc Nephrol. 12. 909-918 (2001)
• [文献書誌] Fujigaki Y: "Sequence of events in the glomerular capillary wall at the onset of proteinuria in passive Heymann nephrotis"Virchows Arch. 4388. 136-145 (2001)
• [文献書誌] Watanabe T: "Glomerular CD8^+ cells predict progression of childhood IgA nephropathy"Pediatr Nephrol. 16. 561-567 (2001)
• [文献書誌] Inoue T: "FAT is a component of glomerular diaphragms"Kidney Int. 59. 1003-1012 (2001)
• [文献書誌] Kasuga H: "Effects of anti-TGF-β type II receptor antibody on experimental glomerulonephritis"Kidney Int. 60. 1745-1755 (2001)
• [文献書誌] Oyanagi A: "Crescent-forming mechanism in an irreversible Thy-1 model in rats"Naphron. 89. 439-447 (2001)
• [文献書誌] Kawauchi H: "mAb 5-1-6 nephropathy and nephrin"Microsc Res Tech. (in press).
• [文献書誌] Ikezumi Y: "FK506 ameliorates proteinuria and glomerular lesions induced by anti-Thy 1.1 monoclonal antibody 1-22-3"Kidney Int. (in press).
• [文献書誌] 清水不二雄: "糸球体濾過過障壁の構造と機能"骨と透析. 50. 283-288 (2001)
• [文献書誌] 清水不二雄: "尿蛋白と尿細管間質障害"細胞. 33. 2-3 (2001)
• [文献書誌] 清水不二雄: "糸球体腎炎の発症と治療"医歯薬出版株式会社. 114 (2001)
• [文献書誌] 清水不二雄: "腎臓病の最新医療"先端医療技術研究所. 412 (2001)