新しいタイプの癌抑制遺伝子であるFHIT遺伝子の機能解析と癌遺伝子治療への展開

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470239
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 三森 功士 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (50322748)
• 研究分担者: 井上 裕 九州大学, 生体防御医学研究所, 助教授 (90203249) ; 森 正樹 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (70190999)
• キーワード: fragile histidine triad / cDNA microarray / Ponasteron A / MAR / adenovirus vector / apoptosis / Msh2

研究概要

cDNA Microarrayを用いたFHIT機能解析:癌抑制遺伝子Fhit発現に伴い経時的に変化する遺伝子、すなわちFhit下流で発現変異のみられる遺伝子群をcDNAマイクロアレイ法を用い包括的に解析して、Fhitによる癌抑制機構を解明する。Fhit発現量に応じた発現遺伝子の変化を明らかにするために、Ponastercm Aによるプロモーターにおける発現量調節機構を用いた。具体的には、Fhit発現がない肺癌細胞株にPonasteron A誘導性Fhit発現ベクターを導入した。FHIT導入株のstable Ponasteron A誘導系をクローニングし、mRNAを抽出したのちにcDNAマイクロアレイ法(TaKaRa Cancer Chip2.1およびGene Springシリコンジェネティック社)によりFhitの発現に伴い変化する遺伝子群を同定したところ、87個の遺伝子が正の相関を認め、逆にFHIT発現に逆相関する4個の遺伝子を同定し得た。現在Nothern blottingあるいはWestern blottingで確認し機能解析を行っている。
FHIT癌抑制遺伝子不活化機構の解明:FongらはFHITのノックアウトマウスがヒトのMuir-Tour like syndromeという病態を表現型として示すことを明らかにした。この症候群はMSH2修復酵素異常時にみられる病態であり、したがってFHIT遺伝子もこの修復酵素異常がFHIT不活化機構の一つの機序と考えられた。さらに、我々はヒトとマウスの塩基配列は高いhomologyを有するが、Matrix Attachment Regionsと呼ばれる領域はヒトとマウスで異なる部位に存在することを明らかにした。この配列がFHIT不活化機構解明の鍵を握っていると考えられ、今後の研究を重ねたい。
FHIT-adeno virus vectorを用いた遺伝子治療:我々は7種の食道癌株化細胞にFHIT adeno virus vectorを導入したところ、TE4およびTE14においてcaspase依存性のアポトーシスを伴った抗腫瘍効果を明らかにした。現在はFHIT遺伝子の治療応用のため、至適方法の検討(vectorの到達率や安全性の特定)を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Mimori K., et al.: "Clinical significance of MT1-MMP mRNA expression in breast cancer"Oncol Rep. 8. 401-403 (2001)
• [文献書誌] Mori M.et al.: "Absence of Msh2 protein expression is associated with alteration in the FHIT locus and Fhit protein expression in colorectal carcinoma"Cancer Res. 61. 7379-7382 (2001)
• [文献書誌] Ishii H. et al.: "Effect of adenoviral trancduction of FHIT into esophageal cancer cells"Cancer Res. 61. 1578-1584 (2001)
• [文献書誌] Shiraishi T, et al.: "Sequence conservation at human and mouse orthologous common fragile regions, FRA3B/FHIT and Fra14A2/Fhit"Proc Natl Acad Sci, (USA). 98. 5722-5727 (2001)
• [文献書誌] Mimori K., et al.: "Clinical significance of MT1-MMP mRNA expression in breast cancer"Oncol Rep. 8. 401-403 (2001)
• [文献書誌] Mimori K., et al.: "Localization of thymidine phosphorylase gene in colorectal carcinoma tissues by in situ RT-PCR assay"Oncology. (in press). (2002)