高精度な癌細胞定量システムによる癌患者諸組織中の微量癌細胞数定量と臨床応用

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13470241
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 前原 喜彦 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (80165662)
• 研究分担者: 佐伯 浩司 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (80325448) ; 北村 薫 九州大学, 医学部・附属病院, 講師 (70234276)
• キーワード: リアルタイムPT-RCT / 微小転移

研究概要

微量癌細胞を定量化するためのマーカー遺伝子を確定するため、株化腫瘍細胞を用いたシミュレーションに先立ち、これら細胞株において候補となるマーカー遺伝子がどのようなバラツキをもって発現しているかを検討し、さらに実際に患者より得られた各々の腫瘍組織における解析結果とも比較する必要がある。この解析にはRT-PCRを使用することも可能であるが、より定量性の高い手法として定量的Northern blottingを用いた。特にこの解析では1細胞あたりの発現量が問題となる。Total RNAを回収する細胞数、回収量などに留意、さらにブロット上にコピー数スタンダードをおいて検討した。
次にマーカー遺伝子の発現量が正確に知られているリファレンス細胞を培養後、顕微鏡下に定量、一定の量を健常人から採取された末梢血に添加し、プロトコールどおりに細胞成分を分離、濃縮、total RNAを調製した。逆転写酵素による一次鎖合成を行ったあと、リアルタイムPCRを行った。PCR産物が増加し始めるポイントからマーカー遺伝子配列の初期コピー量を割り出し、投入した細胞数とともプロットし、検量曲線を定めることができた。本研究のようなストラテジーによってのみ腫瘍患者個体内における腫瘍細胞の病態依存的な動態の詳細が明らかにされ得ると期待される。

研究成果

• [文献書誌] Maehara Y, Oda S, Sugimachi K: "The instability within : problems in current analysis of microsatellite instability"Mutation Research. 461(4). 249-263 (2001)
• [文献書誌] Noda H, Maehara Y, Irie K, Kakeji Y, Sugimachi K: "Growth pattern and expressions of cell cycle regulator proteins p53 and p21^<WAF1/CIP1> in early gastric carcinoma"Cancer. 92(7). 1828-1835 (2001)
• [文献書誌] Ikeda Y, Oda S, Abe T, Ohno S, Maehara Y, Sugimachi K: "Features of microsatellite instability in colorectal cancer : Comparison between colon and rectum"Oncology. 61(2). 168-174 (2001)
• [文献書誌] Saeki H, Tanaka S, Tokunaga E, Kawaguchi H, Ikeda Y, Maehara Y, Sugimachi K: "Genetic alterations in human Tcf-4 gene in sporadic gastrointestinal cancers with microsatellite instability in the Japanese"Oncology. 61(2). 156-161 (2001)
• [文献書誌] Tanaka S, Sugimachi K, Saeki H, Kinoshita J, Ohga T, Shimada M, Maehara Y. Sugimachi K: "A novel variant of WISP 1 lacking a von Willebrand type C module overexpressed in scirrhous gastric carcinoma"Oncogene. 20(39). 5525-5532 (2001)
• [文献書誌] Shibahara K, Sugio K, Osaki T, Uchiumi T, Maehara Y. Kohno K, Yasumoto K, Sugimachi K, Kuwano M: "Nuclear expression of the Y-box binding protein, YB-1, as a novel marker of disease progression in non-small-cell lung cancer"Clin Cancer Res. 7(10). 3151-3155 (2001)