| 研究分担者 |
東野 史裕 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助手 (50301891)
進藤 正信 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助教授 (20162802)
安田 元昭 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助教授 (90239765)
山本 玲子 独立行政法人物質・材料研究機構, 材料研究所・生体材料研究チーム, 主任研究員
川崎 貴生 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (90002229)
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| 研究概要 |
本年度は,骨関連タンパクであるオステオポンチン,オステオネクチンをヒト骨芽細胞様細胞であるSaos2に導入し,基質への接着能,接着強度を測定するとともに,走査型電子顕微鏡にて観察した.また,インプラント埋入後に糖尿病に罹患した際のインプラント周囲の骨組織の変化をin vivoで検討するため,ストレプトゾトシンで誘発した糖尿病ラットを用いて組織学的,組織計量学的に検索した.
ヒトオステオポンチンcDNAのC末端にFLAGtagを付与し,レトロウイルスをベクターとしてSaos2に導入し,puromycinを用いてセレクションを行った.RT-PCRにてオステオポンチン遺伝子のmRNAの発現を確認するとともに,Western blottingにてFLAGtagを含むオステオポンチンの産生を確認した.オステオネクチンについては,N末端にHAtagを付与し,リポフェクション法を用いてSaos2に導入し,RT-PCRとWestern blottingにて,mRNAの発現とHAtagを含むオステオネクチンの産生を確認した.これらのオステオポンチン遺伝子導入細胞(Saos2-OP),オステオネクチン遺伝子導入細胞(Saos2-ON)の基質への接着能と接着強度を測定した.Saos2-OPについては,基質としてポリスチレン,チタンを用いた場合,接着能は,コントロールであるSaos2に比較し有意に高く,また接着強度は有意差は認められないものの高い傾向を示した.Saos2-ONについては,接着能は,Saos2に比較し低い傾向を示した.接着強度に関しては現在測定中である.走査電顕による観察の結果,Saos2-OPおよびSaos2-ONは,Saos2と形態に差異が認められた.
インプラントを埋入し,オッセオインテグレーション成立後にストレプトゾトシンにて糖尿病を誘発させた場合,インプラント周囲の骨の量は減少するものの,オッセオインテグレーションは破壊されないことが示唆された.
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