| 研究課題/領域番号 |
13470509
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
山村 研一 熊本大学, 発生医学研究センター, 教授 (90115197)
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| 研究分担者 |
荒木 喜美 熊本大学, 発生医学研究センター, 助教授 (90211705)
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| キーワード | 家族性アミロイドニューロパシー / トランスサイレチン / ES細胞 / 相同組換え / Cre-loxP |
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| 研究概要 |
家族性アミロイドポリニューロパシーは常染色体優性遺伝病であり、異型トランスサイレチン分子が全身にアミロイドとして沈着し末消・自立神経障害を引き起こす疾患である。アミロイドの沈着に到るには、4量体であるトランスサイレチン分子の解離、凝集、アミロイド形成の3つのステップが考えられている。従って4量体の解離を阻止することにより、結果的にアミロイド形成も阻止できると考えられている。非常に興味あることに、119番目のThrのMetへの変異(Thr119Met)では、例えば30番目のValがMetに置換した変異(Val30Met)とのコンパウンドヘテロ接合体になると、むしろ4量体が安定し、アミロイド沈着もあまり観察されないと報告されている。そこで、マウスのトランスサイレチン遺伝子は破壊しつつ、ヒト遺伝子自在に挿入するため、我々が開発した変異型lox71を含む相同組換えベクターを構築した。非常に複雑な構造であり、左端から、ジフテリア毒素フラッグメントA遺伝子ーヒトTTRの第1エクソンの一部も含む上流約2.6kbの配列ーlox71ーPGKneoーloxPーpolyAーlox2272ー第1エクソンの後半も含み第1イントロン約7.9kbである。翻訳開始点は、第1エクソンの後半にあるので、このベクターが挿入されることにより、マウス遺伝子は完全に破壊されることとなる。また、lox71とlox2272間のDNAは、別にlox66ー挿入したい遺伝子ーlox2272を含むプラスミドを準備し、これをCreの発想ベクターとともにES細胞に導入することで、効率良く置換できることを明らかにした。
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