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2002 年度 研究成果報告書概要

鱗翅目昆虫における無核精子の機能解明と精子保存への機能利用

研究課題

研究課題/領域番号 13556009
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 蚕糸・昆虫利用学
研究機関北海道大学

研究代表者

佐原 健  北海道大学, 大学院・農学研究科, 助手 (30241368)

研究分担者 伴野 豊  北海道大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (50192711)
齋藤 裕  北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20142698)
伴戸 久徳  北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20189731)
竹村 洋子  (財)大日本蚕糸会, 蚕業技術研究所, 研究員
山舗 直子  酪農学園大学, 環境システム学部, 助教授 (40112578)
研究期間 (年度) 2001 – 2002
キーワードカイコ / 有核精子 / 無核精子 / 凍結保存 / 人工授精 / 二型精子 / 遺伝資源保存 / 重複交尾
研究概要

カイコをはじめとする鱗翅目昆虫では受精する有核精子と核を持たず受精しない無核精子が存在する(二型精子)。本研究では、倍数体では無核精子、高温処理した大造では有核精子のみが機能することを利用して二型精子の個体別分離技術を開発した。交尾ならびに人工授精いずれの方法を用いても受精卵が得られるという特徴を生かし、この実験系により無核精子が鱗翅目昆虫の受精に必要不可欠であることを世界で初めて実験的に証明した。また、二型精子の雌交尾器内における行動を観察し、無核精子は交尾嚢から受精嚢へと移動できるのに対し、有核精子単独ではこの行動が観察されないことを明らかにした。人工授精により雌交尾器へと供給される有核精子は精包内の無核精子の恩恵にあずかることなく受精できない。これは、交尾嚢内での両精子の混合が有核精子の受精に重要であることを示している。
分離した二型精子の一方だけを凍結、もしくは両精子凍結保存-融解し、人工授精実験を行った。この結果、凍結-融解精子の受精能力低下は、大部分が無核精子の凍結-融解耐性によるもので、一部有核精子の量や質によっても変化することが明らかになった。凍結保存によるカイコ遺伝資源保存を念頭に置いて、通常の精子(有核精子と無核精子を混在する)凍結後、人工授精で受精率が極端に低下する(ほぼ0%)品種を用いた、人工授精実験を行った。凍結-融解もしくは非凍結の無核精子を混合したところ凍結保存精子による受精率が確実に向上する。しかしながら、無核精子の機能には大きなばらつきあり、無核精子作成に用いる系統の選抜などさらなる検討が必要と考えられた。以上の結果から凍結保存精子と無核精子の人工授精によりカイコ品種の系統維持を行える礎が完成した。

  • 研究成果

    (63件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (63件)

  • [文献書誌] Sahara K: "Application of artificial insemination technique to separated eupyrene and apyrene sperm in Bombvx mori"Journal of Experimental Zoology. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sahara K: "Roles of actin networks in peristaltic squeezing of sperm bundles in Bombyx mori"Journal of Morphology. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N: "Glucose and ecdysteroid increase apyrene sperm production in in vitro cultivation of spermatocysts of Bombyx mori"Journal of Insect Physiology. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sahara K: "Moth sex chromatin probed by comparative genomic hybridization (CGH)"Genome. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Matsuyama T: "Functional analysis of an immediate early gene, iel, of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus in mammalian cells"Journal of Insect Biotechnology and Sericology. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yamagishi J: "DNA Microarrays of baculovirus genomes ; Differential expression of viral genes in two susceptible insect cell lines"Archives of Virology. (in press). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 小島 桂: "トランスジェニックカイコの家蚕核多角体病ウイルスに対する抵抗性"北海道大学北方圏フィールド科学センター研究農場報告. (印刷中). (2003)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Saito Y: "Differences in diapause attributes between two forms distinguished by male-to-male aggression in a subsocial spider mite, Schizotetranychus miscanthi"Ecological Research. 17・6. 645-653 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N: "In vitro cultivation of spermatocysts to matured sperm in the silkworm, Bombyx mori"Development, Growth and Differentiation. 44・4. 273-280 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sahara K: "Double copulation of a female with sterile diploid and polyploid males recovers fertility in Bombyx mori"Zygote. 10・1. 23-29 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Isobe R: "Antisense and double-strand RAN interferenece in a silkworm ovarian cell line"Journal of Insect Biotechnology and Sericology. 71・1. 43-47 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Ito T: "Cloning and expression of novel crystal protein genes cry39A and 39orf from Bacillus thuringiensis subsp. aizawai BUN1-14 encoding mosquitocidal proteins"Journal of Insect Biotechnology and Sericology. 71・3. 123-128 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yamada Y: "Use of an N-terminal half truncated IE1 as an antagonist of IE1, an essential regulatory protein in baculovirus"Virus Research. 90・1-2. 253-261 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yamashiki N: "Presence of Phenol DP-glucuronosyltransferase in bovine alveolar macrophages and bronchial epithelial cells"Toxicology. 176・3. 221-227 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yukuhiro K: "Significant Levels of Sequence Divergence and Gene Rearrangements have Occurred Between the Mitochondrial Genomes of the Wild Mulberry Silkmoth, Bombyx mandarina, and its Close Relative, the Domesticated Silkmoth, Bombyx mori"Molecular Biology and Evolution. 19・8. 1385-1389 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Lin J-Z: "A new species of Tarsonemus (Acari : Tarsonemidae),prey on eggs of Schizotetranychus longus Saito. J. Acarol. Soc. Jpn. 11, 85-89"Journal of Acarology Society Japan. 11・1. 85-89 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Marec F: "Meiotic pairing of sex chromosome fragments and its relation to atypical transmission of a sex-linked marker in Ephestia kuehniella (Insecta, Lepidoptera)"Heredity. 87・12. 659-671 (2001)

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  • [文献書誌] 小島 桂: "家蚕濃核病ウイルス(BmDNV-2)特異的DNAポリメラーゼ活性と末端配列認識タンパク質の解析"日本蚕糸学雑誌. 70・2. 103-108 (2001)

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  • [文献書誌] 佐原 健: "天蚕全齢人工飼料育に用いる飼料樹葉特性の検討"日本応用動物昆虫学雑誌. 45・2. 94-98 (2001)

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  • [文献書誌] Kawamura N: "Meiotic pairing of sex chromosome fragments and its relation to atypical Significance of peristaltic squeezing of sperm bundles in the silkworm, Bombyx mori : Elimination of irregular eupyrene sperm nuclei of the triploid"Zygote. 9・2. 159-166 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Banno Y: "Inheritance of one cocoon shape mutant named "Flossycocoon" of the silkworm, Bombyx mori"Journal of Insect Biotechnology and Sericology. 70・3. 189-192 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Nakamura T: "Genetics of the "wild silkworm translucent" mutant (ows), discovered in the progenies after the cross between the domesticated silkworm, Bombyx mori and the wild mulberry silkworm, Bombyxmandarina"International Journal of Wild Silkmoth & Silk. 6. 7-10 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Xia QY: "Identification of three annexin IX isoforms generated by alternative splicing of the carboxyl-terminal exon in silkworm, Bombyx mori"Insect Biochemistry and Molecular Biology. 32・1. 9-14 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Xia QY: "Identification of three annexin IX isoforms generated by alternative splicing of the carboxyl-terminal exon in silkworm, Bombyx mori"Insect Biochemistry and Molecular Biology. 32・1. 9-14 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kojima K: "Tandem repetition of baculovirus iel promoter results in upregulation of transcription"Archives of Virology. 146・1. 1-8 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Masaki K: "Thermal stability and enzymatic activity of a smaller lysozyme originated from silkworm moth (Bombyx mori)"Journal of Protein Chemistry. 20・2. 107-113 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Koganezawa N: "Construction of an expression system of insect lysozyme lacking thermal stability : the effect of selection of signal sequence on level of expression in the Pichia pastoris expression system"Protein Engineering. 14・9. 705-710 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Li Y: "Genome organization of the densovirus from Bombyx mori (BmDNV-1) and enzyme activity of its capsid"Journal of General Virology. 82・11. 2821-2825 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yanagida H: "Egg depositing behavior as apredetor avoidance tactic of Yezonychus sapporoensis Ehara (Acari, Tetranychidae)"Journal of Ethology. 19・1. 55-62 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Chittenden AR: "Why are there feeding and non-feeding larvae in phytoseiid mites (Acari : Phytoseiidae)?"Journal of Ethology. 19・1. 63-66 (2001)

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  • [文献書誌] Marec F: "Sex chromosomes in Ephestia kuehniella (Insecta, Lepidoptera) tolerate a telomere loss"Annals de Genetique. 44・Suppl. S131 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N: "A cause of male sterility in polyploid silkworms"Development, Growth and Differentiation. 43・Suppl. S122 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Sahara K, Takemura Y: "Application of artificial insemination technique to separated eupyrene and apyrene sperm in Bombyx mori"J Exp Zool.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sahara K, Marec F, Eickhoff U, Traut W: "Moth sex chromatin probed by comparative genomic hybridization (CGH)"Genome.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sahara K, Kawamura N: "Roles of actin networks in peristaltic squeezing of sperm bundles in Bombyx mori"J. Morphol.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N, Sahara K, Fugo H: "Glucose and ecdysteroid increase apyrene sperm production in in vitro cultivation of spermatocysts of Bombyx mori"J. Insect Physiol.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Matsuyama T, Asano S, Sahara K, Bando H: "Functional analysis of an immediate early gene, ie1, of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus in mammalian cells"Journal of Insect Biotechnology and sericology. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yamagishi J, Isobe R, Takebuchi T, Bando H: "DNA Microarrays of baculovirus genomes : Differential expression of viral genes in two susceptible insect cell lines"Arch Virol.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kojima K, Saitoh H, Yamada Y, Tamura T, Isobe R, Asano S, Sahara K, Bando H: "Resistance of transgenic slikworm against Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV)"Res Bull Univ Farm Hokkaido Univ.. in press. (2003)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Saito Y, Sakagami T, Sahara K: "Differences in diapause attributes between two forms distinguished by male-to-male aggression in a subsocial spider mite, Schizotetranychus miscanthi Saito"Ecol. Res.. 17(6). 645-653 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N, Sahara K: "In vitro cultivation of spermatocysts to matured sperm in the silkworm, Bombyx mori"Dev. Growth Differ.. 44(4). 273-280 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sahara K, Kawamura N: "Double copulation of a female with sterile diploid and polyploid males recovers fertility in Bombyx mori"Zygote. 10(1). 23-29 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Isobe R, Kojima K, Sahara K, Asano S, Bando H: "Antisense and double-strand RAN interference in a silkworm ovarian cell line"J. Insect Biotech. Seric.. 71(1). 43-47 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Ito T, Sahara K, Bando H, Asano S: "Cloning and expression of novel crystal protein genes cry39A and 39orf2 from Bacillus thuringiensis subsp.aizawai Bun1-14 encoding mosquitocidal proteins"J Insect Biotech. Seric.. 71. 123-128 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yamada Y, Matsuyama T, Quan GX, Kanda T, Tamura T, Sahara K, Asano S, Bando H: "Use of an N-terminal half truncated IE1 as an antagonist of IE1, and essential regulatory protein in baculovirus"Virus Res.. 90(1-2). 253-261 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yamashiki N, Yokota H, Sakamoto M, Yuasa A: "Presence of phenol DP-glucuronosy Itransferase in bovine alveolar macrophages and bronchial epithelial cells"Toxicology. 176(3). 221-227 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yukuhiro K, Sezutsu H, Itoh M, Shimizu K, Banno Y: "Significant Levels of Sequence Divergence and Gene Rearrangements have Occurred Between the Mitochondrial Genomes of the Wild Mulberry Silkmoth, Bombyx mandarina, and its Close Relative, the Domesticated Silkmoth, Bombyx mori"Mol. Biol. Evol.. 19(8). 1385-1389 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Lin J-Z., H. Nakao, Y. Saito: "A new species of Tarsonemus (Acari : Tarsonemidase), prey on eggs of Schizotetranychus longus Saito"J. Acarol. Soc. Jpn.. 11. 85-89 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Marec F, Tothov A, Sahara K, Traut W: "Meiotic pairing of sex chromosome fragments and its relation to atypical transmission of a sex-linked marker in Ephestia kuehniella (Insecta, Lepidoptera)"Heredity. 87(12). 659-671 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kojima K, Hirano A, Asano S, Sahara K, Bando H: "Analysis of the BmDNV-2 specific DNA polymerase and the common terminal sequences biding proteins"J Seric Sci Jpn. 70(2). 103-108 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Sahara K, Saitoh H, Kikuch K, Yamada Y, Asano S, Bando H: "Comparison of dried-leaf powder of host plants as a component of an artificial diet for the wild silkworm, Antheraea yamamai Guerin-Meneville (Lepidoptera : Saturniieda)"Jpn J Appl Entomol Zool. 45(2). 94-98 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N, Yamashiki N, Saitoh H, Sahara K: "Significance of peristaltic squeezing of sperm bundles in the silkworm, Bombyx mori : Elimination of irregular eupyrene sperm nuclei of the triploid"Zygote. 9(2). 159-166 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Bannno Y, Fujii H, Doira H: "Inheritance of one cocoon shape mutant named "Flossycocoon" of the silkworm, Bombyx mori"Journal of insect biotechnology and sericology. 70. 189-192 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Nakamura T, Banno Y, Fujii H: "Genetics of the "wild slkworm translucent" mutant(ows), discovered in the progenies after cross between the domesticated silkworm, Bombyx mori and the wild mulberry silkworm, Bombyxmandarina"Int. J. Wild silkmoth & silk. 6. 7-10 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Xia QY, Fujii H, Kusakabe T, Banno Y: "Identification of three annexim IX isoforms generated by alternative splicing of the carboxyl-terminal exon in silkworm, Bombyx mori"Insect Biochem. Mol. Biol.. 32. 9-14 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kojima, K., T. Hayakawa, S. Asano, H. Bando: "Tandem repetition of baculovirus iel promoter results in upregulation of transcription"Archives of Virology. 146. 1-8 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Masaki, K., T. Aizawa, N. Koganesawa, T. Nimori, H. Bando, K. Kawano, K. Nitta: "Thermal stability and enzymatic activity of a smaller lysozyme originated from silkworm moth (Bombyx mori)"Journal of Protein Chemistry. 20. 107-113 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Koganezawa N, Aizawa T, Masaki K, Matuura A, Nimori T, Bando H, Kawano K, Nitta K: "Construction of an expression system of insect lysozyme lacking thermal stability : the effect of selection of signal sequence on level of expression in the Pichia pastoris expression system"Protein engineering. 14. 705-710 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Li, Y., Z. Zadori, H. Bando, R. Dubuc, G. Fediere, J. Szeilei, P. Tijssen: "Genome organization of the densovirus from Bombyx mori (BmDNV-1) and enzyme activity of its capsid"J. Gen. Virol.. 82. 2821-2825 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Chittenden AR, Saito Y: "Why are there feeding and non-feeding larvae in phytoseiid mites (A cari : Phytoseiidae)?"J Ethol. 19. 63-66 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yanagida H, Saito Y, Mori K, Chittenden AR: "Egg depositing behavior as apredetor avoidance tactic of Yezonychus sapporoensis Ehara (Acari, Tetranychidae)"J Ethol. 19. 55-62 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Kawamura N, Yamashiki N, Sahara K: "A cause of male sterility in polyploid silkworms"Dev Growth Differ.. 43(Suppl). S122 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Marec F, Sahara K, Traut W: "Sex chromosomes in Ephestia kuehniella (Insecta, Lepidoptera) tolerate a telomere loss"Ann Genet (Paris). 44(Suppl). S131 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2004-04-14  

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