イヌヘルペスウイルスをベクターとする犬原虫感染症の多価生ワクチンの開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13556049
• 研究機関: 帯広畜産大学
• 研究代表者: 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10292096)
• 研究分担者: 土屋 耕太郎 (財)日本生物科学研究所, 主任研究員 (70207405) ; 井上 昇 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (10271751) ; 横山 直明 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (80301802) ; 河本 麻里子 動物衛生研究所, 研究官 ; 岩田 晃 (財)日本生物科学研究所, 主任研究員 (70193745)
• キーワード: バベシアギブソニ / ネオスポラ / イヌヘルペスウイルス / ベクターワクチン / 大腸菌発現系 / ワクシニアウイルス / バキュロウイルス / SCIDマウス感染モデル

研究概要

本研究はイヌヘルペスウイルスをベクターとする犬原虫感染症の多価生ワクチンを開発し、犬原虫感染症を予防することを最終目的とし、以下のような基本手順で実施していく。1)バベシアギブソニとネオスポラ原虫に対するモノクローナル抗体の作製。2)主要免疫原性タンパク質の同定と感染防御能の検討。3)感染防御に関わる遺伝子の検索とクローニング。4)感染防御遺伝子を発現する組換えイヌヘルペスウイルスの構築。5)犬における組換えワクチンの感染防御効果の検討。本年度に得られた主な成績は以下の通りである。
1)バベシアギブソニP29、P50遺伝子及びネオスポラP43、P36遺伝子をそれぞれ大腸菌発現系にて発現させ、得られた組換えタンパク質を抗原としたELISA法を確立した。この方法はイヌのバベシアギブソニとネオスポラ原虫感染症の診断に有用であることを確認した。2)バベシアギブソニP29、P50遺伝子及びネオスポラP43、P36遺伝子をバキュロウイルス発現系にて発現させ、得られた組換えタンパク質の抗原性がそれぞれの原虫由来の天然型タンパク質に類似していることを確認した。3)バキュロウイルスで発現したP50をウサギに免疫して得られた抗血清はバベシアギブソニ原虫の増殖を著しく抑制することをSCIDマウス感染モデルにて確認した。4)バベシアギブソニP29、P50遺伝子及びネオスポラP43、P36遺伝子を発現する組換えワクシニアウイルスを構築した。

研究成果

• [文献書誌] Nishikawa, Y., et al.: "Canine herpesvirus ORF2 is a membrane protein modified by N-linked glycosylation"Virus Res.. 87・1. 1-9 (2002)
• [文献書誌] Nishikawa, Y., et al.: "Neospora caninum NcSRS2 is a transmembrane protein that contains a glycosylphosphatidylinositol anchor in insect cells"Vet.Parasitol.. 109・3. 191-201 (2002)
• [文献書誌] Nishikawa, Y., et al.: "Characterization of Neospora caninum surface protein NcSRS2 based on baculovirus expression system and its application for serodiagnosis of Neospora infection"J.Clin.Microbiol.. 39・11. 3987-3991 (2002)
• [文献書誌] Fukumoto, S., et al.: "Cloning and expression an antigen of Babesia gibsoni in Escherichia coli and its use for the immunodiagnosis of canine babesiosis"J.Protozool.Res.. 12(印刷中). (2002)