牛白血病発症に関連するウシ主要組織適合遺伝子を検出するための診断技術の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13556055
• 研究機関: 特殊法人理化学研究所
• 研究代表者: 間 陽子 理化学研究所, 分子ウイルス学研究ユニット, 研究ユニットリーダー (50182994)
• 研究分担者: 田島 茂 理化学研究所, 分子ウイルス学研究ユニット, 基礎科学特別研究員 (60311346)
• キーワード: ウシMHC(BoLA)-DRB3 / 牛白血病ウイルス(BLV) / 多型性 / BLV Env gp51抗原 / モノクローナル抗体 / PCR-Sequence Based Typing法 / 疾患感受性 / 白血病発症

研究概要

我々は以前に牛白血病ウイルス(BLV)が誘発する地方病性牛白血病(EBL)の発症がウシMHC(BoLA)-DRB3によって規定されていることをみいだした。
本年は、BLV Envに対する抗体反応性とBoLA DR抗原との相関性の解析を行った。
液性免疫の主な標的となるBLV Env gp51抗原に対するモノクローナル抗体(Mab)の反応性とBoLA-DRB3対立遺伝子の多型性との相関性を解析した。53頭のウシより血清及びゲノムDNAを調整した。BLV感染の有無はゲル内沈降反応法、組み換えgp51を固相化した競合ELISA法、及びPCR法によるBLV provirusの検出により調べた。またBLVのゲノタイプはPCR-Restriction Fragment Length Polymorphism法、また、BoLA-DRB3対立遺伝子はPCR-SBT法により決定した。集団間の有意差検定は遺伝子頻度に基づく直接確率検定により行った。また、ヘテロ接合度の有意差検定はFisherの直接確率検定法を用いた。BLV感染牛の血清を標識抗-gp51Mabを用いた競合ELISAに供した結果、陽性血清の抑制率に個体差が認められた。そこで、抑制率が平均値以上の値を示したウシを高反応性群、及び平均値以下の値を示したウシを低反応性群とし、各群のBoLA-DRB3対立遺伝子を調べた。まず、両群の間で対立遺伝子頻度の差異を検定したところ、有意差は見られなかった。次に、BoLA-DRβ鎖を構成するアミノ酸残基を比較したところ、DRβ^<66>のヘテロ接合度が高反応性群において有意に低いことを見いだした。ヒト及びマウスDR分子のX線回折像をもとに、DRβ^<66>の機能を予測したところ、MHCとT細胞レセプターCDR1及びCDR2とが相互作用するアミノ酸残基である可能性が示された。これらの結果から、DRβ^<66>がホモ接合体である個体において、gp51に対する免疫応答性が強く誘導される可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Tajima S., et al.: "Mutant Tax protein from bovine leukemia virus with ability to activate the expression of c-fos"J.Virology. 76. 2557-2562 (2002)
• [文献書誌] Tajima S., et al.: "A mutant form of the Tax ptrotein of bovine leukemia vitus (BLV) with enhanced transactivaton activiy, increases the expression and propagaion of BLV invitro but not in vivo"J.Virology. 77. 1894-1903 (2003)
• [文献書誌] Takeshima, S., et al.: "Characterization of DRB3 alleles in the MHC of Japanese Shorthorn cattle by polymerase chain reaction-sequence-based typing"J.Dairy Science. 85. 1630-1632 (2002)
• [文献書誌] Tajima S., et al.: "Latency of viral expression in vivo is not related to CpG methylation in the U3 and part of the R region of the long teminal repeart of bovine leukemia virus"J.Virology. (in press). (2003)
• [文献書誌] Konnai, S., et al.: "The influence of ovine MHC class II DRBI alleles on immuno response in bovine leukemia virus infection"Microbiol.Immunol.. (in press). (2003)