マンソン住血吸虫における全BACクローンの染色体マップの完成

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13557021
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 平井 啓久 京都大学, 霊長類研究所, 助教授 (10128308)
• キーワード: マンソン住血吸虫 / ゲノムプロジェクト / BACクローン / 染色体マッピング / 染色体彩色プローブ / 染色体顕微切断法

研究概要

BACクローンのマッピングは前年度に引き続き継続中である。現在までのところ、染色体上にマップできたクローンは合計250個である。より迅速にマップする方法を改良する必要を感じている。今年度から染色体彩色プローブの作製に取りかかった。以下の手技を開発した。(1)ガラスキャピラリーを用いて、先端口径直径2μ以下のガラスナイフを作製。(2)染色体標本は26X40cm^2のカバーガラス上に作製(3)4%ギムザ染色液で1分染色後乾燥した標本を倒立顕微鏡に設置し、マイクロマニピュレーターに取り付けたガラスナイフで各染色体を削り取る。(4)削り取った染色体断片はガラスナイフの先端と共に滅菌した0.5mlチューブに入れ保存する。(5)各染色体の断片が5〜10本になったところで、プロティナーゼを用いて染色体の蛋白質を融解する。(6)その後、普遍的プライマーを用いて、染色体DNAのPCR増幅を行う。(7)PCR産物をPCRを用いて蛍光色素標識し、蛍光イン〓ツーハイブリダイゼーション(FISH)によって、その産物の染色体上の位置を確認する。(8)特異的な〓在位置を示す産物は、pGMT-Tベクターを用いてクローニングする。非特異的な局在性を示す産物は、ゲノムDNAあるいは反復配列Smaを用いて非特異的反復配列を除去後、クローニングを行う。
現在、この手技を用いて各染色体の彩色プローブを作製中である。彩色プローブは各染色体を明確に同〓するのに有効である。

研究成果

• [文献書誌] Hirai, H., et al.: "Cytogenetic differentiation of two synpatric tree shrew taxa found in the southern part of the Isthmus of Kra"Chromosome Research. 10/4. 313-327 (2002)
• [文献書誌] Go, Y., et al.: "Mhc-DRB genes evolution in lemurs"Immunogenetics. 54/6. 403-417 (2002)
• [文献書誌] Foulk, B.W., et al.: "Adenylosuccinate lyase of Schistosoma mansoni : gene structure, mRNA expression, and analysis of the predicted peptide structure of a potential chemotherapeutic target"International Journal for Parasitology. 32/. 1487-1495 (2002)
• [文献書誌] Hirai, H., et al.: "Genetic mechanisma and property of a whole-arm transloction (WAT) between chromosomes 8 and 9 agile gibbons (Hylobates agiis)"Chromosome Research. 11/1. 37-50 (2003)
• [文献書誌] Taguchi, T., et al.: "A useful probe for analyzing Y chromosome evolution of the Old World monkey generated by chromosome microdissection"Chromosome Research. (in press). (2003)
• [文献書誌] Iwase, M., et al.: "Differentiation of sex chromosomal amelogenin genes in primates and other mammals"Proc.Nati.Acad.Sci. USA. (in press). (2003)