ヘリコバクター・ピロリの成分ワクチン開発基盤

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13557022
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 平山 壽哉 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (50050696)
• 研究分担者: 牧野 壮一 帯広畜産大学, 畜産学部, 助教授 (30181621) ; 青山 伸郎 神戸大学, 医学部・附属病院, 助教授 (30243299) ; 和田 昭裕 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助手 (70253698)
• キーワード: ヘリコバクター・ピロリ / VacA毒素 / 病原遺伝子群 / 成分ワクチン / ワクチン開発

研究概要

cag Pathogenicity Island(PAI)を持つヘリコバクター・ピロリが宿主の胃上皮細胞のNF-kBを顕著に活性化する。そこで、約30の遺伝子からなるcagPAI中のいかなる因子が宿主の胃上皮細胞のNF-kBを活性化させるのか明らかにする目的で、cagPAI中の遺伝子をPCR法にて分取して動物細胞発現ベクターに組み込んだ。組み込む際に、タイプ4分泌機構を構成する遺伝子、シグナルペプチドを持つ遺伝子(唯一打ち込まれる蛋白であるCagAはシグナルペプチドを持たないから)を除外した。従って、これらに属さないcagPAI中の15遺伝子を動物細胞発現ベクターに組み込んだ(HP520、521、523、526、530、531、533、534、535、536、541、543、546、548、549)。作製した発現ベクターをNF-kBのレポーター遺伝子と同時にMKN45細胞にトランスフェクションをおこない、NF-kBの活性を調べた。
その結果、HP533のみが弱いNF-kBの活性化を示した。そこで,この活性が有意な活性化かどうかを明確にするために、HP533の遺伝子をMKN45細胞にトランスフェクションし、培養液中に分泌されるIL-8の量をELISAにて定量したが、特に培養上清中には有意なIL-8の分泌は認められなかった。従って、他の残りの遺伝子の可能性を追求している。

研究成果

• [文献書誌] Wada, A. et al.: "Helicobacter pylori-mediated transcriptional regulation of the human--defensin-2 gene requires NF-kB"Cellular Microbiology. 3. 1811-1819 (2001)
• [文献書誌] Suzuki, J. et al.: "Dynamin is involved in the vacuolation induced by Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin (VacA) in human epithelial cells"J.Clin.Inv.. 107. 15200-15206 (2001)
• [文献書誌] Mori, N. et al.: "Induction of Monocyte Chemoattractant Protein 1 by Helicobacter pylori Involves NF-kB"Infect Immun.. 69. 1280-1286 (2001)
• [文献書誌] Ishihara K. et al.: "Shared antigenicity between Helicobacter pylori and periodontopathic Campylobacter rectus strains"FEMS Microbiol Lett.. 197. 23-27 (2001)
• [文献書誌] Hamanaka, Y. et al.: "Expression of human -defensin-2 (hBD-2) in Helicobacter pylori-induced gastritis : antibcterial effect of hBD-2 against for H. pylori"Gut. 49. 481-487 (2001)
• [文献書誌] Kimura M. et al.: "Impairment of glutathione metabolism in human gastric epithelial cells treated with vacuolating cytotoxin from Helicobacter pylori"Microb.Pathog.. 31. 29-36 (2001)
• [文献書誌] 平山壽哉: "最新医学"Helicobacter pylori VacAの構造と毒性発現. 4 (2001)