| 研究課題/領域番号 |
13557041
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
内科学一般
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
尾崎 承一 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (00231233)
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| 研究分担者 |
杉野 弘 徳島大学, 分子酵素学研究センター, 教授 (50211305)
小川 佳宏 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (70291424)
田中 真生 京都大学, 医学研究科, 助手 (10332719)
大本 安一 大塚製薬, 医薬第一研究所, 主任研究員
吉崎 和幸 大阪大学, 健康体育部, 教授 (90144485)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2003
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| キーワード | 慢性関節リウマチ / ホリスタチン関連蛋白 / FRP / gp130-RAPS / コラーゲン誘導関節炎 / DBA / 1マウス / トランスジェニックマウス / ノックアウトマウス |
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| 研究概要 |
関節リウマチ(rheumatoid arthritis ; RA)は破壊性・増殖性滑膜炎を特徴とする自己免疫疾患であり、その原因は未解明である。我々は滑膜細胞抗原の中にRA病因と密接に関連するものがあると考え、RA患者滑膜cDNAライブラリーから患者滑液IgGの認識する抗原として、ホリスタチン関連蛋白(follistatin-related protein ; FRP)をクローニングした。本研究の目的はRA関節炎におけるFRPの意義を明らかにすることにある。そのための手段の一つとして、FRPを関節内で過剰発現するトランスジェニックマウスの作製を試みた。他の方法として、FRPの関節における機能を解析するために、培養滑膜細胞に対する作用やマウスで実験的に誘導された関節炎に対する作用を調べた。
マウスFRP(mFRP)のトランスジーン(Col2al-mFRP, Col2al-FLAG-mFRP)を完成させた。これらはII型コラーゲンプロモーターで発現が制御される構造を持つが、この構造が正しく構築され正常に機能することを確認した。Col2al-FLAG-mFRPを制限酵素で切り出し直鎖状DNA断片を調製し、DBA/lマウスの前核期卵にトランスジーンを注入した。トランスジーン陽性FOを得て、このFOを関節炎好発系の野生型DBA/lと交配しFlをつくり系統維持中である。さらにより多くの系統のFOを得るため、トランスジーンの注入も再度行っている。
FRPは培養滑膜細胞からのマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP-1,MMP-3)およびプロスタグランジン(PGE2)の産生を抑制することを明らかにした。この抑制にはc-fos遺伝子発現のdown regulationが関与している可能性が示唆された。FRPによる培養滑膜細胞に対するこれらの抑制作用は、精製した患者由来自己抗体により解除された。
抗II型コラーゲン抗体とLPSを投与されたBALB/cマウスの腹腔内にFRPを投与すると関節炎の誘導が抑制された。この抑制にはc-fos、ets-2、IL-6、MMP-3、MMP-9などの遺伝子の発現抑制が関与して可能性が、cDNAアレイを用いた解析から示唆された。
以上のin vitroおよびin vivoでの研究から、FRPの関節炎における意義が明らかとなり、RAの治療標的としてFRPの妥当性が示唆された。
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