B型肝炎のラミブジン耐性獲得のメカニズムの解析と対策の検討

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13557049
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 茶山 一彰 広島大学, 医学部, 教授 (00211376)
• キーワード: HBV / real time PCR / whole genome / mutation / 薬剤耐性

研究概要

平成13年度には、耐性株出現例と、非出現例の特徴を比較するため、長期投与例16例の治療前のHBVの全塩基配列、耐性出現例の出現後の全塩基配列、非出現例で、polymerase chain reactionによりviral DNA断片が増幅可能な症例の全塩基配列を決定べく解析を行っている。現在HBVのwhole genomeをcloningし、cloningとsequencingを行っている。また、変異HBVの増殖能力を検討するため、現在培養細胞に感染させる3tandemのconstractを作成中である。HBV genomeが大腸菌内で容易に遺伝子変異などの修飾を受けるため、sequenceを確認し、GenBankに登録されているHBV genomeと比較し、Taq DNA polymeraseによる変異、大腸菌による変異と考えられるものをsite directed mutagenesisの手法を用いて塩基置換し、完全長のgenomeを得ることが出来た。また、培養肝細胞系を用いて、感染が成立することを確認するため、real time PCRによるHBVの高感度定量系を作成した。HBVキャリアから、ウイルス量の多い症例を選択し、その血清をヒト肝細胞培養系に添加し、ウイルスの増減が肝細胞以外の培養細胞に添加した場合の比べて異なるかどうかについて検討するため、現在培養上清のウイルス量を測定中である。血清添加による培養肝細胞のviabilityには問題がないことが確認されている。また、培地からのHBVの回収、real time PCRによる増幅も問題ないことも確認することが出来た。

研究成果

• [文献書誌] Y.Arase, K.Ikeda, K.Chayama et al.: "Efficacy of IFN therapy based on duration period of negative HCV-RNA during IFN administration"Hepatol Res. 19・1. 22-30 (2001)
• [文献書誌] Kobayashi M, Suzuki Y, Suzuki F, K.Chayama et al.: "Lamivudine therapy for spontaneously occurring severe acute exacerbation in chronic hepatitis B virus infection : a preliminary study"Am J Gastroenterol. 96・2. 557-562 (2001)
• [文献書誌] Someya T, Suzuki Y, Arase Y, K.Chayama et al.: "Interferon therapy for flare-up of hepatitis B virus infection after emergence of lamivudine-induced YMDD motif mutant"J Gastroenterol. 36・2. 133-136 (2001)
• [文献書誌] N.Akuta, K.Chayama, F.Suzuki et al.: "Risk Factors of Hepatitis C Virus-Related Liver cirrhosis in young adults : Positive family history of liver disease and transporter associated with antigen processing 2(TAP2) ^*0201 Allele"J Med Virol. 64. 109-116 (2001)
• [文献書誌] K.Chayama, Suzuki F, Tsubota A et al.: "Evaluation of quantitative measurements of hepatitis C virus RNA to predict sustained response to interferon by genotype"J Virol Methods. 95・1-2. 33-45 (2001)
• [文献書誌] Ikeda K, Saitoh S, Kobayashi M, Chayama K et al.: "Long-term interferon therapy for 1 year or longer reduces the hepatocellular carcinogenesis rate in patients with liver cirrhosis caused by hepatitis C virus : a pilot study"J Gastroenterol Hepatol. 16. 406-415 (2001)