2002 年度実績報告書

超微量内分泌かく乱物質定量のための卵巣特異的遺伝子マイクロアレイの開発

研究課題

研究課題/領域番号	13557088
研究機関	福井医科大学
研究代表者	宮本薫福井医科大学, 医学部, 教授 (30125877)
研究分担者	峯岸敬群馬大学, 医学部, 教授 (00209842) 水谷哲也福井医科大学, 医学部, 助手 (90322734) 山田一哉福井医科大学, 医学部, 助教授 (20263238)
キーワード	マイクロアレイ / サブトラクション / ダイオキシン / 内分泌かく乱物質
研究概要	本研究では、環境中に存在しうる様な極微量のダイオキシンを、卵巣での遺伝子発現を指標にDNAマイクロアレイをベースとして検出する、全く新しい方法を開発することを試みた。低濃度のダイオキシンで処理したラット卵巣顆粒膜細胞cDNAライブラリーから無処理の卵巣顆粒膜細胞cDNAライブラリーを差し引く事(サブトラクション)によって、ダイオキシンによって誘導(若しくは抑制)される遺伝子のみから構成されるcDNAライブラリー(サブトラクションcDNAライブラリー)を構築した。このcDNAライブラリーから無作為に数千個のクローンをピックアップしプラズミド調製したのち、PCRによりインサートcDNAのみを増幅して一枚のガラスプレート上にスポットしてマィクロアレイを作成した。さらに低濃度のダイオキシンで処理したラット卵巣顆粒膜細胞及び無処理の細胞よりmRNAを調製し、それぞれ異なった蛍光色素で標識したのち、前述のDNAマイクロアレイとハイブリダイズして、ダイオキシン誘導性もしくは抑制性クローンを同定することに成功した。同定したクローン全てについて塩基配列を決定し、ダイオキシン関連遺伝子群を確定した。これらの成果に基づき、極微量のダイオキシンによって卵巣顆粒膜細胞に誘導される遺伝子群のクローン化を進めた。このDNAマイクロアレイは、極微量のダイオキシンに反応する遺伝子のみをスポットしているため、これらの遺伝子発現の変化を観察する事によって極微量のダイオキシンの検出が可能である。本研究により、私共のオリジナルな知見と方法に基づく全く新しい方法で、環境中の極微量のダイオキシンを検出することで、現状では大変な労力とコストがかかるダイオキシン測定を、高感度化、迅速化、簡略化出来る道筋が示されたことは大きな成果である。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Satoh, T.: "Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-Y stimulates the growth arrest and DNA-damage inducible 153 gene in non-small cell lung carcinoma cells"Oncogene. 21. 2171-2180 (2002)
[文献書誌] Yoshino, M.: "Early growh response gene-1 (Egr-1) regulates the expression of the rat luteinizing hormone receptor gene"Biol.Reprod.. 66. 1813-1819 (2002)
[文献書誌] Inoue, K.: "The effect of transforming growth factor-beta on the expression of luteinizing hormone receptor in cultured rat granulosa cells"Biol.Reprod.. 67. 610-615 (2002)
[文献書誌] Hirano, S.: "Rat zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX1), a nuclear factor-YA-interacting nuclear protein, forms a homodimer"Gene. 290. 107-114 (2002)
[文献書誌] Yamada, K.: "Functional analysis and the molecular dissection of zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX1)"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 368-374 (2002)
[文献書誌] Sekiguchi, T.: "Transcriptional regulation of Epiregulin gene in the rat ovary"Endocrinol.. 143. 4718-4729 (2002)

2002 年度 実績報告書

超微量内分泌かく乱物質定量のための卵巣特異的遺伝子マイクロアレイの開発

研究代表者

宮本 薫 福井医科大学, 医学部, 教授 (30125877)

研究成果

[文献書誌] Satoh, T.: "Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-Y stimulates the growth arrest and DNA-damage inducible 153 gene in non-small cell lung carcinoma cells"Oncogene. 21. 2171-2180 (2002)

[文献書誌] Yoshino, M.: "Early growh response gene-1 (Egr-1) regulates the expression of the rat luteinizing hormone receptor gene"Biol.Reprod.. 66. 1813-1819 (2002)

[文献書誌] Inoue, K.: "The effect of transforming growth factor-beta on the expression of luteinizing hormone receptor in cultured rat granulosa cells"Biol.Reprod.. 67. 610-615 (2002)

[文献書誌] Hirano, S.: "Rat zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX1), a nuclear factor-YA-interacting nuclear protein, forms a homodimer"Gene. 290. 107-114 (2002)

[文献書誌] Yamada, K.: "Functional analysis and the molecular dissection of zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX1)"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 368-374 (2002)

[文献書誌] Sekiguchi, T.: "Transcriptional regulation of Epiregulin gene in the rat ovary"Endocrinol.. 143. 4718-4729 (2002)

2002 年度実績報告書

宮本薫福井医科大学, 医学部, 教授 (30125877)