歯周炎の遺伝子診断と免疫グロブリンA受容体ターゲッティング療法の確立

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13557189
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 小林 哲夫 新潟大学, 歯学部附属病院, 講師 (00215344)
• キーワード: 歯周炎 / 遺伝子多型 / 免疫グロブリン / 好中球 / r40kDa OMP / Porphyromonas gingivalis / ターゲッテイング療法

研究概要

1 遺伝子診断:
好中球特異的な免疫グロブリンG受容体FcγRIIIB(CD16)、免疫グロブリンA受容体FcαRI(CD89)遺伝子やB細胞特異的FcγRIIB(CD32)遺伝子の塩基配列を解析したところ、CD16,CD89では各1カ所、FcγRIIBでは合計7カ所で新たな遺伝子多型が認められた。特に、FcαRI nt 324 A/G、FcRIIB nt775 T/C遺伝子多型は侵襲性歯周炎と関連していることが判明した。また、従来解析してきた3種のFcγR機能的遺伝子多型(FcγRIIA-R131/H131、FcγRIIIA-158V/158F、FcγRIIIB-NA1/NA2)は歯周炎の早期発症性、重症度、再発性、抵抗性との関連性が確認されたが、代表的なリウマチ疾患である全身性エリテマトーデス(SLE)患者でもFcRIIA-R131の割合が有意に高く、FcRIIA遺伝子は歯周炎とSLEの共通のリスク遺伝子であることが示唆された。
2 ターゲッテイング療法:
歯周病原菌Porphyromonas gingivalisの40kDaリコンビナント外膜蛋白質を作製し、ヒト抗体産生マウス腹腔に接種・免疫し、ヒト特異抗体を合計99クローン作製することに成功した。そのうちの全てがIgGクローンであり(IgG1:84クローン、IgG2:11クローン、IgG4:4クローン)、IgAクローンは認められなかった。IgG1クローンを無作為に選択し、P.gingivalis r40kDa OMPに対する結合能を調べたところ、60倍高濃度のポリクローナル抗体とほぼ同等であり、好中球の貧食能でも10000倍高濃度のポリクローナル抗体と同等なオプソニン活性が認められた。P.gingivalis特異抗体と免疫グロブリンA受容体FcαRI特異抗体よりBispecific抗体を遺伝子工学的手法により作製することに成功し、現在は末梢静脈血・歯肉溝滲出液の好中球に対するオプソニン活性を評価しており、好中球FcαRターゲッテイング療法の有用性を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Tetsuo Kobayashi, et al.: "Effective In Vitoro Clearance of Porphyromonasgingivalis by Fcα Receptor I(CD89) on Gingival Crevicular Neutrophils"Infection and Immunity. Vol.69,No.5. 2935-2942 (2001)
• [文献書誌] Tetsuo Kobayashi, et al.: "The Fcγ Receptor Genotype as a Severity Factor for Chronic Periodontitis in Japanese Patients"Journal of Periodontology. Vol.72,No.10. 1324-1331 (2001)
• [文献書誌] Noriko Sugita, et al.: "Increased Frequency of FcγRIIIb-NA1 Allele in Periodontitis-resistant Subjects in an Elderly Japanese Population"Journal of Dental Research. Vol.80,No.3. 914-918 (2001)
• [文献書誌] Kouji Yamamoto, et al.: "Evidence for a novel polymorphism affecting both N-linked glycosylation and ligand binding of the IgG receptor IIIB(CD16)"Tissue Antigens. Vol.57,No.4. 363-366 (2001)
• [文献書誌] Keiko Yasuda, et al.: "Seven single nucleotide substitutions in human Fcγ receptor IIB gene"Tissue Antigens. Vol.58,No.5. 339-342 (2001)
• [文献書誌] Tetsuo Kobayashi, et al.: "Risk of Periodontitis in Systemic Lupus Erythematosus is Associated with Fcγ Receptor Polymorphisms"Journal of Periodontology. Vol.74,No.3. 378-384 (2003)