クローン技術によるNODおよびdy疾患モデルマウス作出の実用化に関する研究

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13558099
• 研究機関: 東京農業大学
• 研究代表者: 河野 友宏 東京農業大学, 応用生物科学部, 教授 (80153485)
• 研究分担者: 伊藤 守 (財)実験動物中央研究所, 免疫研究室, 室長 (00176364) ; 永淵 正法 九州大学, 医療技術短期大学部, 教授 (00150441)
• キーワード: マウス / クローン / 筋ジストロフィー / 糖尿病

研究概要

本研究の目的は、核移植によるクローンマウス生産技術を用いて、ES細胞から疾患モデルマウスの生産システムを構築し、疾患の原因究明および治療法開発の基礎研究に貢献することにある。そこで、特に本研究では、I型糖尿病モデルとして使用されているNODマウス(non-obese diabetic mouse)および筋ジストロフィーモデル(dy)および(mdx)マウスに対象を絞り、申請研究年限の3年以内に両疾患モデルマウス由来のES細胞からクローンマウスの生産を目指す。研究2年目の研究成果を要約すると、1)NODマウス由来ES細胞からクローンマウスの生産を試み、すでに胚盤胞の作成に成功しているが、産仔の生産には至っていなかった。そこで、亜株を用いてさらにた移植試験を行った。しかしながら、現在までのところ、産仔の生産には至っていない。2)新たに、筋ジストロフィーモデルマウスのdy系統およびmdx系統からES細胞の樹立を試み、継代培養可能なES細胞株の樹立に成功した。3)これらのES細胞が、核移植操作に耐えられるか検討したところ、ノコタゾールによるM期への同調培養が可能であること、また、センダイウイルスを用いて未受精卵に融合させることが可能なことを明らかにした。さらに、核移植により生産した卵子をSrCl2処置により高率に活性化を誘起できることを確認した。今後は、dyおよびmdxマウスES細胞を用いて、クローンの生産を試みる。

研究成果

• [文献書誌] Shimozawa, N., Ono, Y., Kimoto, S., Hioki, K., Araki, Y., Shinkai, Y., Kono, T., Ito, M.: "Abnormalities in cloned mice are not transmitted to the progeny"Genesis. 34. 203-207 (2002)
• [文献書誌] Obata, Y., Kono, T., Hatada, I.: "Maturation of mouse fetal germ cells in vitro"Nature. 418. 497-498 (2002)
• [文献書誌] Shimozawa, N., Ono, Y., Muguruma, K., Hioki, K., Arai, Y., Kono, T., Ito, M.: "Direct production of gene-targeted mice from ES cells by nuclear transfer and gene transmission to their progeny"Exp. Anim.. 51. 375-381 (2002)
• [文献書誌] Sotomaru, Y., Katsuzawa, Y., Hatada, I., Obata, Y., Sasaki, H., Kono, T.: "Unregulated expression of the imprinted genes H19 and lgf2r in mouse uniparental fetuses"J. Biol. Chem.. 277. 12474-12478 (2002)
• [文献書誌] Kono, T., Sotomaru, Y., Katsuzawa, Y., L, Dandolo: "Mouse parthenogenetic embryos with monoallelic H19 expression can develop to day 17.5 of gestation"Dev. Biol.. 243. 294-300 (2002)
• [文献書誌] Obata, Y., Kono, T.: "Maternal primary imprinting is established at a specific time for each gene throughout oocyte growth"J. Biol. Chem.. 277. 5285-5289 (2002)