| 研究概要 |
黄体組織培養(甲斐)と放出プロジェステロンの測定(園田)
妊娠期(妊娠9,18,22日)の卵巣を採取し、黄体を卵巣から分離した。96穴プレートを使用し、1個ごとにRPMI1640(+5%FSC)溶液中で培養した。血清中や培養液中のP_4レベルは市販のEIA測定キット(Cayman社)を用いて測定した。黄体は4時間培養後洗浄することで培養液を更新し、さらに24時間培養した。培養後の培養液中のP_4レベルは、9,18そして22日と妊娠が進むにつれて減少した。個体ごとの全黄体の合計P_4量では、妊娠9日は18と22日より有意に多かった。血清中P_4レベルはこれまでの報告同様、妊娠の経過とともに減少した。血中と培養液中のP_4レベルには有意な相関が示され、スナネズミの妊娠中の血中P_4は黄体に依存することが示唆された。
黄体細胞培養(甲斐)と放出プロジェステロンの測定(園田)
妊娠期(妊娠9,18,22日)の卵巣を採取し、分離した黄体をコラゲナーゼにより分解し、パーコール比重液により細胞を単離した。共焦点レーザー顕微鏡による観察で20μm程度の大型細胞と10μm程度の小型細胞が認められ、大型細胞の割合は妊娠9日のほうが多かった。大型細胞集団の存在はフローサイトメーター解析でも認められた。単離細胞を4x10^4個ごと96穴プレートに播種し、24時間培養した。培養液だけの対照群の培養液中のP_4量では、妊娠9日が18日よりほぼ2倍多く、LH(1-1000ng/ml)を培養液に添加した場合、その放出量は上昇した。これに対し、PGF2α(0.1-100pmol/ml)を培養液に加えた場合には、無添加群とほぼ同等かより低下した。ラット妊娠16日の同数の細胞と比較すると、無添加群とLH添加群のいずれも、スナネズミのほうが有意に多くのP_4を放出することが明らかとなった。これらのことから、スナネズミでは妊娠中のP_4産生において黄体が重要であることが示された。
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