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今期は迅速同定に使用する特異的プライマーの設計を行った。この目的で過去に箱根・大涌谷の試料から分離・保存してあった好熱性古細菌について16S rDNA部分塩基配列を決定し、その系統学的帰属を行った。各分離培養条件(気相・温度・pH)における分離株の帰属は次の通りであった。括弧内は分離株数を示す。
1.Air・50℃・pH2.5:Sulfolobus metallicus-like(2)及び Thermoplasma acidophilum-like(1)
2.N_2・50℃ pFI2.5:Thermoplasma acidophilum-like(2)
3.H_2-CO_2・70-85℃・pH_2.5:Acidianus ambivalens-like(5)
4.Air・70-85℃・pH2.5:Sulfurisphaera ohwakuensis-like(5)
5.N_2・85℃・pH3.5-6.0:Vulcanisaeta distributa (7)
以上の結果より、まずSulfolobales目及びSulfurisphaera属・Acidianus属・Thermoplasma属の各属に特異的なPCRプライマーを設計した。これらプライマーを分離株DNAをテンプレートとしてPCR増幅を行ったところ、該当する菌株のみにPCR産物が認められた。一方、Sulfolobus metallicus-like菌株及びVulcanisaeta属特異的プライマーについては現在設計中である。
次年度には試料から多数の分離培養を試み、上記等の特異的プライマーを用いた迅速同定法との連携によって難培養性好熱性古細菌の分離システムを構築する予定である。
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