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前年度の実験から、胎生下垂体においてグルココルチコイドが成長ホルモン(GH)発現のスイッチを入れる際そのグルココルチコイドの作用仲介物質として働く分子がC/EBPδであろうということがある程度実証された。本年度はC/EBPδのGH遺伝子の転写を促進するメカニズムの解明をラットばかりでなくヒトのGH遺伝子についても検討を行った。
産生細胞であるcos7細胞を用いて測定した。C/EBPδ、C/EBPαはラット下垂体のcDNAからRT-PCR法により得、これをCMVプロモーターを含む発現ベクターpcDNA4に挿入し発現プラスミドを作製した。C/EBPβは理研DNAバンクより購入した。ラットGHプロモーター(翻訳開始点の上流約1700塩基)はMtT/S細胞においてルシフェラーゼを発現させ、この発現量はC/EBPδを共発現させることにより約3倍に上昇した。プロモーターを300塩基に短縮してもC/EBPδの活性は変化なかったので、C/EBPδのGHプロモーター上の結合部位は翻訳開始点の上流300塩基までの領域にあると推定された。C/EBPαはδと同様GHプロモーターの活性を上昇させたが、その作用はδよりも弱かった。またβはプロモーター活性を低下させた。Cos7細胞を用いた結果から、C/EBPδの作用は下垂体特異的転写因子であるpit-1の存在が必須であることがわかった。このような結果はGH遺伝子の転写調節にC/EBPδが関わっていること、さらにC/EBPδはGHプロモーターの翻訳開始点の上流300塩基までの領域に結合し、pit-1との直接或いは間接的な相互作用の結果ラットGH遺伝子の転写を調節していることが考えられる。これに対してヒトGH遺伝子のプロモーター活性(翻訳開始点の蒸留1600塩基)はに対してC/EBPδは転写促進効果を示さなかった。ヒトではC/EBPδの結合部位がさらに上流に存在するか、或いはC/EBPδはヒトのGH遺伝子転写には関与しないのかもしれない。
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