| 研究概要 |
Amphiphysin I(以下amph I)はニューロンの軸索終末に強く発現し、amph Iのアイソフォームであるamphiphysin II(amph II)とともに、シナプス小胞膜のクラスリン介在性エンドサイトーシスに関与するタンパク質である。我々はヒト網膜のcDNAクローニングを行い、従来型のamph Iの他に3アミノ酸残基と数百アミノ酸残基からなる2つの挿入部分をもつ新規のamph Iスプライスバリアント(amph Ir)が網膜特異的に発現することをヒトおよびラットで見いだし、このバリアントの網膜における生理的機能の解明を試みている。
平成13年度は、amph Irのみを特異的に認識するポリクローナル抗体を作製し、この抗体を用いてラット網膜におけるamph Irの局在を免疫組織化学的に検索した。その結果、amph Irは視細胞(桿体と錐体)と双極細胞の軸索終末部に特異的に存在することが明らかとなり、amph Irが網膜リボンシナプス機能に関与する可能性を示した。
平成14年度は、免疫沈降法とイムノブロットを用いてamph Irと相互作用するタンパク質の検索を行った。免疫沈降複合体に含まれるタンパク質として、これまでにamph II, clathrin,およびactinを同定した。さらに、amph Irとこれらのタンパク質が視細胞と双極細胞の軸索終末で共局在することを蛍光二重標識法により確認した。これらの結果から、amph Irが網膜リボンシナプスで1)クラスリン依存性のシナプス小胞膜回収機構へ関与する可能性、2)アクチン細胞骨格系と機能的連携をもつ可能性が考えられ、現在解析を進めている。
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