| 研究概要 |
本研究課題では、構造を維持したラットの脳軟膜の細動脈標本を作製して、内皮細胞からの液性因子または電気的細胞間情報伝達を介した平滑筋細胞の制御を調べることを試みた.まず,隣接する内皮細胞と平滑筋の両方に同時にdouble perforated patch-clamp法を適用した.電位固定下に内皮細胞へ過分極パルスを与えるとその電極を通る内向き電流が得られたが、同時に平滑筋細胞を測定する電極には外向きの電流(ギャップ電流)が惹起された.その逆に、平滑筋細胞へ過分極パルスを与えるとその電極を通る内向き電流が得られたが、同時に内皮細胞を測定する電極には外向きのギャップ電流が流れた.ギャップ電流はα-glycyrrhetinic acid (α-GA)で抑制された.この結果から、内皮細胞と隣接する平滑筋細胞に電気的な連絡があることが明らかになった.また、液性因子の役割を調べるために、平滑筋細胞で見られるエンドセリン-1 (ET-1)誘発の周期性Ca^<2+>活性化Cl^-電流(I_<Cl(Ca)>)におけるbradykininの作用を調べた.その結果、I_<Cl(Ca)>はbradykininで強く抑制された.この抑制作用はα-GAやcyclooxygenase阻害薬のindomethacinでは影響を受けず、NO合成酵素阻害薬のL-nitroarginineや細胞外でNOをトラップするoxyhemoglobinでも強く阻害された.以上からこの抑制作用は細胞間隙に放出される一酸化窒素(NO)によることが示された.本研究によって、微小循環の組織構築を最小限維持した形で内皮細胞と平滑筋細胞の多様なコミュニケーションを調べることができると思われる.
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