FAK族チロシンキナーゼCAKβ/PYK2とそれに結合するHic-5の機能の研究

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670127
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 佐々木 輝捷 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 教授 (00045494)
• 研究分担者: 佐々木 洋子 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 講師 (60045424)
• キーワード: タンパク質チロシンキナーゼ / チロシンリン酸化 / CAKβ / PYK2 / Peptide Mass Fingerprinting法 / Graf / アンドロゲン受容体

研究概要

私達は焦点接着キナーゼ(FAK)分子族第2の非受容体型タンパク質チロシンキナーゼであるCAKβ/PYK2を、研究している。CAKβの関与するシグナル伝達路を更に明らかにするために、CAKβに結合・会合するタンパク質を検索した。全長CAKβのN末にFlagタグを付けてHEK293細胞に発現し、固相化抗Flagタグ抗体を用いて結合タンパク質を共沈した。共沈タンパク質をPeptide Mass Fingerprinting法(PMF法)により検索することにより、データベース上にある4つのタンパク質がCAKβに結合する候補として浮上したので、検討を進めている。CAKβに結合・会合するタンパク質の酵母two-hybrid系を用いたスクリーニングにより、アンドロゲン(AR)受容体による転写活性を促進するHic-5とは異なるcoactivatorを同定した。このcoactivatorはAR受容体の存在下にCAKβに結合する。現在、結合部位、CAKβによるこのcoactivatorの活性調節などを検討している。CAKβのP859を中心とするプロリンに富む配列には、GrafがそのSH3ドメインで結合する。Grafは低分子量Gタンパク質RhoAに対するGAP活性を有する。GrafはFAKではなくCAKβにより特異的にリン酸化され、このリン酸化の結果GAP活性が抑制され、細胞内にRhoAのGTP型が蓄積することを示した。

研究成果

• [文献書誌] Yue-Qiao Huang, et al.: "CAKβ/PYK2 Kinase is a Signaling Link for Induction of Long-Term Potentiation in CA1 Hippocampus"Neuron. 29・2. 485-496 (2001)
• [文献書誌] Gerald D.Frank, et al.: "Unique Regulation of c-Jun N-Terminal Kinase by PYK2/CAK-β in Angiotensin II-Stimulated Vascular Smooth Muscle Cells"Biochemical and Biophysical Research Communication. 286・4. 692-696 (2001)
• [文献書誌] Gerald D.Frank, et al.: "Requirement of Ca^<2+> and PKCδ for Janus Kinase 2 Activation by Angiotensin II : Involvement of PYK2"Molecular Endocrinology. 16・2. 367-377 (2002)
• [文献書誌] Chieko Takagi, et al.: "Increased Expression of Cell Adhesion Kinaseβ in Human and Rat Crescentic Glomerulonephritis"American Journal of Kidney Diseases. 39・1(in press). (2002)
• [文献書誌] Hiroshi Aoto, et al.: "Nuclear Translocation of Cell Adhesion kinaseβ / Proline-rich Tyrosine Kinase 2"Cell Structure and Function. 27・1(in press). (2002)