組織損傷修復時の生体初期反応-sheddingの分子機構―創傷治癒モデルでの解析―

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670139
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 東山 繁樹 大阪大学, 医学部, 助教授 (60202272)
• キーワード: HB-EGF / Wound Healing / Metalloprotease / Shedding / ADAM

研究概要

私どもはこれまでに、組織の再生・修復で重要な役割を担うと考えられる細胞膜アンカー型細胞増殖因子としてEGFファミリーのメンバーであるHB-EGFを新規に同定し、皮膚の創傷治癒時にsheddingが亢進していることを報告してきた。さらに、私どもが新たに開発したEGFファアミリーのshedding酵素阻害剤を用いて、皮膚創傷治癒時での表皮角化細胞からのEGFファPミリーのsheddingとそれによって引き起こされる表皮角化細胞の遊走が創傷治癒には必須である事を明らかにしてきた。これらの研究成果に基づき、本年度はHB-EGF shedding酵素の同定を中心課題として行い、以下の結果を得た。
従来報告されている膜結合型メタロプロテアーゼADAM9によるHB-EGFプロセシングをADAM9ノックアウトマウス由来線維芽細胞を用いて検証した。その結果、ADAM9+/+線維芽細胞およびADAM9-/-線維芽細胞ともに、HB-EGFプロセシングはTPA刺激により一過性に誘導され、両者に有意な差は認められなかった。そこで新たなHB-EGF shedding酵素を同定するために,HB-EGF sheddingの制御因子であるPKCδに結合する膜型メタロプロテアーゼを酵母two-hybrid法でスクリーニングし、得られた膜型メタロプロテアーゼの野生型及びドミナントネガテイブ型によりTPAによって誘導されるHB-EGF sheddingが各々増幅および抑制するかどうかを検討した。その結果、ADAM12二がHB-EGFのプロセシング酵素であることを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Tokita, Y: "Regulation of neuregulin expression in the injured rat brain and cultured astrocytes"J. Neroscience. 21. 1257-1264 (2001)
• [文献書誌] Koh, Y.H.: "Inactivation of glutathione peroxidase by No leads to the accumulation of H2O2 and the induction of HB-EGF via c-Jun NH2-terminal kinase in rat aortic smooth muscle cells"FASEB J.. 15. 1492-1474 (2001)
• [文献書誌] Umeda, Y.: "Involvement of heparin-binding EGF-like growth factor and its processing by metalloproteases in early epithelial morphogenesis of the submandibular"Develop. Biol.. 237. 202-211 (2001)
• [文献書誌] Yoshinaka, T.: "Identification and characterization of novel mouse and human ADAM33s with potential metalloprotease activity"Gene. 282. 227-236 (2002)
• [文献書誌] Asakura, M.: "Cardiac hypertrophy is inhibited by antagonism of ADAM12 processing of HB-EGF"Nature Med.. 8. 35-40 (2002)
• [文献書誌] Weskamp, G.: "Mice lacking the metalloprotease-disintegrin MDC9(ADAM9)have no evident major abnormalities during development or adult life"Mol. Cell. Biol.. 22. 1537-1544 (2002)