結核菌感染による細胞骨格タンパク質の再構成に関わる病原因子の同定

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670289
• 研究機関: 国立国際医療センター(研究所)
• 研究代表者: 切替 照雄 国立国際医療センター研究所, 感染・熱帯病研究部, 部長 (50192563)
• キーワード: 結核菌 / TACO / マクロファージ / ロドコッカク エクイ / BCG

研究概要

本研究の目的は、結核菌感染における結核菌由来の新規の病原因子の同定することである。そのために病原因子を探索する為の新たな活性測定系を開発すると共にこの系の特性を解析した。また、臨床分離株を含む結核菌の培養・収集を行ない、病原因子がどのような物質であるのか検索を実施した。
TACO抗体の作製、TACOタンパク質の精製:
マウス及びヒトのTACOペプチドフラグメントを合成し、これを用いてモノクロナール抗体を作製した。作製した抗体はマウス及びヒト双方マクロファージ由来TACOを認識できることをウェスタンブロットおよび蛍光顕微鏡で確認した。
結核菌由来の病原因子活性測定の為の細胞培養系の確立:
マクロファージ細胞株を用いた感染実験をロドコッカスエクイやBCG等を用いて行なった。前者の実験では、ロドコッカスエクイ強毒株がファゴソームに取り込まれると、ファゴソームが成熟しリソソームと融合することを共焦点蛍光顕微鏡や電子顕微鏡などで観察した。作製したTACO抗体、チュブリン、アクチン、Rab5やRab7といったファゴソームマーカー、LAMPやカテプシンといったリソソームマーカーに対する抗体を用い、ファゴソーム周辺で起きている結核感染によるTACOと細胞骨格タンパク質の相互作用、細胞骨格タンパク質の再構成を形態学的に観察した。また、臨床分離株を含む結核菌の培養・収集を行ない、病原因子がどのような物質であるのか検索を実施した。
結核菌培養ろ液の粗精製
結核菌臨床分離株、BCGや非定型抗酸菌を培養する。その上清中の活性を細胞培養系及び再構築実験系で測定し、比活性の高い株と培養条件を検討する。さらに、目的とする分子の特性を生化学的に検討し粗精製を行なう。また、必要に応じて測定系の再検討を行なう。

研究成果

• [文献書誌] Hashimoto, H., et al.: "Structural elucidation of capsular polysaccharide from a clinical isolate of Bacteroides vulgatus from a patient with Crohn's disease"Eur. J. Biochem.. 268. 1-7 (2001)
• [文献書誌] Watando, A. et al.: "Mycobacterium avium infection in an immunocompetent young adult related to use of home bath with a circulating water system"Jpn. J. Infect. Dis.. 54. 151-152 (2001)
• [文献書誌] Hashimoto, H., et al.: "Structural study on lipid A and the 0-specific polysaccharide of the lipopolysaccharide from a clinical isolate Bacteroides vulgatus from a patient with Crohn's disease., 269:3715-3721, 2002."Eur. J. Biochem.. 269. 3715-3721 (2002)
• [文献書誌] Takahara, M., et al.: "Pulmonary Mycobacterium avium infection in an immunocompetent aged woman related to use of home bath with a circulating water system"Jpn. J. Infect. Dis.. 55. 213-214 (2002)
• [文献書誌] Takai, S., et al.: "Identification of virulence-associated antigens and plasmids in Rhodococcus equi from AIDS patients and prevalence of virulent R. equi in soil collected from domestic animal farms in Chiang Mai"Trop. Med. Hyg. 66. 52-55 (2002)