| 研究概要 |
1. cDNAの適当な断片を蛋白発現用ベクター(pMalc2)にサブクローニングし大腸菌融合蛋白を得てウサギに免疫しウサギ抗体を作成する。この抗体を用いて蛋白質の細胞内局在を検討する。またウェスタンブロッティングにより分子量の確認と、マウス臓器を用いて諸臓器における発現状況を調べる。さらにマウスmRNAを用いたノーザンブロッティングにより同じく諸臓器における発現状況を調べる。
2. Phytohemagglutinin刺激をしたヒトリンパ球から得られた染色体を用いて、トリチウムラベルしたcDNAを用いてin situ hybridizationを行い、このcDNAの染色体上の局在を調べる。
3. 培養哺乳類細胞(HeLa,COS7)にcMycのタグを付けた全長cDNAをベクター(pcDNA3)に組み込み、これをトランスフェクションし一過性に蛋白質の発現を誘導し、蛍光抗体法所見をウサギ抗体によるものと比較検討する。また種々の削除変異cDNAによるトランスフェクションも行い全長cDNAによる蛍光抗体法所見と比較する。
|
