SAA1遺伝子プロモーター領域によるSAA産生調節の解明と治療への応用

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670479
• 研究機関: 東京女子医科大学
• 研究代表者: 寺井 千尋 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (40188660)
• 研究分担者: 梶山 浩 東京女子医科大学, 医学部, 助手 ; 小関 由美 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (30266837)
• キーワード: 慢性関節リウマチ / 続発性アミロイドーシス / SAA / SAA1 / 遺伝子 / プロモーター / CRP / HepG2

研究概要

1.SAA1プロモーター多型による転写活性の違いを検討するために、SAA1 promoterの3ケ所のSNPs(-61 C/G,-13 C/T,-2 G/A)を含む領域をPCR増幅し(SAA1 promoterにはSNPsの組み合わせにより4種類のハプロタイプC-C-G、G-C-G、G-C-A、C-T-Gが存在する)、レポーターベクター(pGL3-basic)に挿入後、Hep G2細胞にトランスフェクションしルシフェラーゼアッセイを行った。4種類のSAA1 promoterはIL-1βとIL-6刺激の後に、初めてルシフェラーゼ活性を示した。ハプロタイプ間に活性の差が認められ、そのうちC-T-Gハプロタイプの活性が最も高値であった。これはアミロイドーシスの発症危険因子である-13TのmRNA産生亢進への関与を示す。さらに、Hep G2をIL-1βとIL-6で刺激後の核抽出液を抽出し、SAA1 promoter SNPsと転写因子との関係をゲルシフトアッセイによって解析中である。
2.SAAのレセプター候補分子であるRAGE遺伝子の多型解析を、RA患者、RA続発アミロイドーシス患者、正常コントロールで行った。RAGE遺伝子のコード領域に2つの新たなSNPを見つけたが3群で差はなかった。RAGEプロモーターのSNPの検討では、3群間で差が認められ、現在症例を増やし検討中である。
3.ステロイドと免疫抑制剤のSAAおよびCRP産生に対する影響を検討するため、HepG2細胞にIL-1βとIL-6刺激と同時に薬剤を添加した後、上清中のSAA・CRP濃度、細胞内のSAA1mRNAを測定した。CRP濃度はいずれの薬剤添加によっても低下したが、SAA濃度はステロイド単独の添加ではむしろ上昇した。さらに詳細を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] H Kaneko, C Terai, M Moriguchi, Y Koseki, H Kajiyama, Kamatani N: "Up-regulation of transcriptional activity by a single nucleotide polymorphism at the 5' flanking region of SAA1 gene that was associated with risk for AA-amyloidosis secondary to RA"Arthritis Rheumatism. 44(9). S358 (2001)
• [文献書誌] Y Koseki, C Terai, H Kaneko, H Kajiyama, Kamatani N: "Effect of corticosteroid and immunosuppressant on serum level and hepatic synthesis of serum amyloid A"Arthritis Rheumatism. 44(9). S218 (2001)
• [文献書誌] M Moriguchi, C Terai, H Kaneko, Y Koseki, H Kajiyama, M Uesato, S Inada, N Kamatani: "A novel single-nucleotide polymorphism at the 5'-flanking region of SAA1 associated with risk of type AA amyloidosis secondary to rheumatoid arthritis"Arthritis Rheumatism. 44. 1266-1272 (2001)
• [文献書誌] M Moriguchi, C Terai, Y Koseki, M Uesato, T Nishikawa, N Kamatani: "Genotypes at SAA1 locus correlate with the clinical severity of AA-amyloidosis"Amyloid. 8. 115-120 (2001)
• [文献書誌] Koseki Y, Terai C, Moriguchi M, Kaneko H, Uesato M, Kamatani N, et al: "Influence of serum amyloid A (SAA) on lipid metabolism in patients with rheumatoid arthritis(RA)"Arthritis Rheumatism. 43(9). S153 (2000)
• [文献書誌] Moriguchi M, Terai C, Koseki Y, Uesato M, Kamatani N, etal: "Influence of genotypes at SAA1 and SAA2 loci on the development and the length of latent period of secondary AA-amyloidosis in patients with rheumatoid arthritis"Human Genetics. 105. 360-366 (1999)