ギャップ結合は胃癌の発育・進展・転移を防止する因子なのか?

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670491
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 峯 徹哉 東海大学, 医学部, 教授 (20157572)
• キーワード: ギャップ結合 / 細胞間コミュニケーション / 培養胃癌細胞株 / 培養胃粘膜細胞 / Wntシグナル / WNT8B / FRAT2 / コネキシン

研究概要

前年度の研究でウサギ胎児胃粘膜培養細胞を作成し培養しながらギャップ結合の発現をみた。培養によって細胞が分化するに従ってギャップ結合が出現してきた。コネキシン43が主なコンポーネントと考えられた。しかし、ギャップ結合がどのような機序で胃癌の発育・進展に関わっているのかについては定かではない。しかも癌化すると減少するギャップ結合の発現様式が何によって調節されているのかは未だに明らかにされていない。そこで本年度はまず胃癌培養細胞を用いてギャップ結合蛋白であるコネキシンの発現を検討した。次に胃癌の発育進展とギャップ結合との関係をみるために胃癌培養細胞と正常胃粘膜細胞を混合培養しギャップ結合の発現と胃癌培養細胞の増殖との関係を検討した。まず胃癌培養細胞では殆どギャップ結合が消失していることが判明した。胃癌培養細胞と正常胃粘膜細胞を混合培養するとギャップ結合が出現し胃癌培養細胞の増殖が低下していることが判明した。これらのことから胃癌の発育・進展においてギャップ結合が重要な働きを示していることが証明し得た。このことによって本年度は当初胃癌細胞にギャップ結合蛋白であるコネキシン遺伝子をtransfectする実験を予定していたが既に目的を果たしたと考え着手しないことにした。ギャップ結合の発現の調節を検討するためにWnt-cateninのシグナルの検討した。細胞のPoly(A)^+RNAはFastTrack2.0Kitで抽出し、Total RNAはIsogen reagentで抽出し、WNT8BやWNT10Bのプローブを用いて行なった。胃癌培養細胞においてWNT8BmRNAの発現が上昇していた。更にWNT10BmRNAの発現も上昇していた。WNTシグナル内の情報伝達WNTシグナルについてその情報伝達機構の中にFRAT2が関与していることが判明した。今回の研究で判明したことは胃癌細胞ではギャップ結合が減少しておりこれと連動してWNTシグナルが増強されていた。いままではギャップ結合あるいはWNTシグナルの片面しかみていなかったが今回の検討でこれらが一体化している可能性を明らかにした。細胞間接合装置とWNTシグナルはなんらかの関係がありしかもWNTが細胞間接合装置の情報伝達を調節している可能性が本研究で示されたと思われる。今後更に詳しい機序について検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Takayama I et al.: "The interstitial cells of Cajal and a gastroenteric pacemaker system"Arch Histol Cytol. 65. 1-26 (2002)
• [文献書誌] Imai K et al.: "Zonal difference inhibition of DNA synthesis caused by anesthetics in cultured rat hepatocytes"Jap J Anesth. 51. 505-508 (2002)
• [文献書誌] Nagata J et al.: "Reversal of drug resistance using hammerhead ribozymes against multidrug resistance associated protein and multidrug resistance 1 gene"Int J Oncol. 21. 1021-1026 (2002)
• [文献書誌] Nagata J et al.: "Angiopoietin-1 and vascular endothelial growth factor expression in human esophageal cancer"Int J Mol Med. 10. 423-426 (2002)
• [文献書誌] Nagata J et al.: "Correlation between interleukin 10 and vascular endothelial growth factor expression in human esophageal cancer"Int J Mol Med. 10. 169-172 (2002)
• [文献書誌] Saitoh T et al.: "Up-regulation of WNT8B mRNA in human gastric cancer"Int J Oncol. 20. 343-348 (2002)
• [文献書誌] Saitoh T et al.: "Molecular cloning and characterization of human GIPC3, a novel gene homologous to human GIPC1 and GIPC2"Int J Oncol. 20. 577-582 (2002)
• [文献書誌] Saitoh T et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse Gipc3"Int J Mol Med. 20. 251-256 (2002)
• [文献書誌] Saitoh T et al.: "Molecular cloning and expression of proto-oncogene FRAT1 in human cancer"Int J Oncol. 20. 785-789 (2002)
• [文献書誌] Saitoh T et al.: "Expression and regulation of WNT8A and WNT8B mRNAs in human tumor cell lines : up-regulation of WNT8B mRNA by beta-estradiol"Int J Oncol. 20. 999-1003 (2002)