平成14年度には、C型急性肝炎患者血清を用いて、HCVの全領域の遺伝子をRT-PCRにより増幅し、direct sequence法で全塩基配列の決定を行い、クローニング、変異導入を行った。H15年度には、それぞれのクローンを連結してdirect sequenceと一致するHCVクローンを作製し、PBR322にHCV全長、T7プロモーター、HDVリボザイムが挿入されたコンストラクト(HCV infectious clone)を得た。さらに、T7 RNA polymerase発現ベクターをキュアード細胞にstable transufectionし、HCV infections cloneをstable transfectionしてHCV持続発現細胞株の作製を試みている。また、HCV infectious cloneをRNAに転写し、その転写産物を、in vivoで投与を行いHCV複製について血清のRT-PCR、肝組織の免疫染色などにより感染性の検討を行っている。 平成14年度には、E2、NS5A蛋白を恒常的に発現する細胞株を作るために、IFN抵抗性のC型肝炎患者のE2、NS5Aをインフルエンザウイルスベクターに組み込んで、293T細胞、MDCK細胞に感染させて蛋白発現を試みたがE2およびNS5A共に蛋白発現が低かった。そこで、平成15年度には、上記のHCVinfectious cloneの各領域(core、E1、E2、NS2、NS3、NS4A、NS5A、NS5B)を真核細胞発現ベクター(pKS366)に組み込んだ。それらをHuh7細胞にtransfectionし、各領域の蛋白発現細胞を作製し、蛍光抗体および免疫沈降により各領域の蛋白発現を確認した。さらには、各領域がpKS336に組み込まれたプラスミドとIFN-β promoter-Luciferaseプラスミドをco-transfectionし、Polyl : Cで刺激し、IFN-βの産生に対する影響について検討を行っている。
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