| 研究概要 |
CFTRは常染色体劣性遺伝性疾患,嚢胞性線維症(cystic fibrosis, CF)の病因分子であり,CFTR遺伝子変異に起因する同蛋白の量的乃至質的異常がCFを引き起こす.加えてCFTRが典型的なCF症例の病因のみならず,さまざまな疾患の成因や修飾因子として重要な役割を果たしていることが近年の研究から次々に明らかにされた.われわれはこれまで,わが国のCF例ではCFTR遺伝子変異スペクトラムが欧米人のそれらと大きく様相を異にすることを明らかにしてきた.本研究は,わが国の患者に見いだされるCFTR変異の蛋白レベルでの機能障害機構をより明確にし,さらにマクロライド(MA)薬の気道炎症患者に対する有効性に関し,その制御機構をCFTR蛋白の機能的側面から解明することを目的とした.平成13年度には,上皮細胞におけるCFTR遺伝子の発現量,splicing,蛋白翻訳に対するMAの作用を検討し,MAがCFTR遺伝子発現レベルには変化させないが,exon 9のsplicingを微増させることを見いだした.チャネル機能へのMAの修飾作用に関しては正常CFTRとCFTRΔF508で恒久的に形質転換されたLLCPK,LLCPKΔF508細胞を用いてMA刺激の影響を検討し,MAが軽度ながらもCFTRチャネルの活性化ももたらしうる可能性を見いだした.平成14年度にはこれまでの研究を受けて,わが国のCF,DPB,CBAVD症例におけるCFTR遺伝子解析を発展させ,これら疾患患者を対象としたより多くの遺伝子変異検索を行い,さらに新しい変異を検出・確認し,CFTR遺伝子変異データベースに登録した.平成15年度には,わが国のCFやDPB,先天性両側精管欠損症(CBAVD)において複数の患者に共通に見いだされるCFTR遺伝子多型125C,およびCFTR missense変異Q1352Hについて,RSV promoterで駆動されるCFTR発現プラスミドpRSV-CFTRをもとにin vitro mutagenesis手法を用いて作成し,これらをLLCPK細胞に導入後恒久的発現細胞株を樹立し,それぞれの機能的欠陥の確認と,さらにCFTR機能に対するMA剤の作用を解析した.
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