| 研究概要 |
ラット心筋梗塞モデルにおいて,ニコランジルとジアゾキサイドの梗塞抑制効果に違いを見いだした.いずれの薬物もミトコンドリアのATP感受性カリウムチャネルを選択的に開口すること知られているが,ニコランジルの効果はprote in kinase Cの選択的阻害薬chelerythrineによって部分的に抑制されるが,ジアゾキサイドではそのような効果は認められなかった.そこで,Langendorff灌流心を用いて,protein kinase Cのisoformの活性化の違いをWestern blotによる細胞内転位をみることで評価した:PKC δとPKC εが細胞質からミトコンドリアヘ転位することが示され,ニコランジルのNO作用がPKCの活性化を介してミトコンドリアK-ATPチャネルを開口し,心筋梗塞抑制に働くことが示された.また,H9C2培養細胞を用いたミトコンドリア膜電位の測定を,JC-1蛍光色素を用い,レーザー共焦点顕微鏡にて行った.今後,薬剤の効果を検討していく予定である.ミトコンドリア内膜に存在するadenylate kinaseの活性化が心筋保護効果に関連するかどうかを検討するため,ischemic preconditioning,またはdiazoxide投与により,adenylate kinase自身のリン酸化の有無,及び,そのアダプター蛋白のリン酸化の有無をリン酸化抗体と免疫沈降法によって確認しているところである.
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