高ずり応力依存性血小板膜小胞体の単球-血管内皮相互作用に及ぼす影響に関する研究

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670760
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 野村 昌作 関西医科大学, 医学部, 講師 (20218358)
• キーワード: 高ずり応力 / PDMP / 血管内皮細胞 / サイトカイン / プロテインキナーゼC / MAPキナーゼ / 単球 / CD40L

研究概要

高ずり応力によって生成された血小板由来マイクロパーティクル(PDMP)の単球および血管内皮細胞の相互作用に及ぼす影響について検討した。PDMPの測定は、フロサイトメトリーで行い、IL-6、IL1β,TNFαの炎症性サイトカインと、TPO、EPO、SCFなどの造血性サイトカイン、およびIL-8、MCP-1、RANTESなどのケモカインの影響を観察した。PDMPの内皮細胞への影響は接着分子ICAM-1の発現について、プロテインキナーゼC(PKC)およびMAPキナーゼ(MAPK)の関与を検討した。PKCはWestern blottingとkinase activityの検出により解析し、MAPKは、p42/p44 MAPK・p38 MAPK、およびJNKについてphosphorylationとtotal volumeについてimmunoblotting法で検出した。また、PDMPによるCOX-2、c-Jun、Elk-1、CREの各transcriptional activityを測定した。さらにPDMP表面におけるCD40Lをフローサイトメトリーで測定するとともに、抗CD40L抗体を用いて内皮細胞のICAM-1発現に対する抑制を検討した。IL-6、TPO、EPOは高ずり応力によるPDMPの生成を増強した。PDMPは内皮細胞のICAM-1の発現を増強し、この際PKCの活性化とCOX-2の誘導が観察された。さらに単球系のTHP-1におけるp38 MAPKおよびJNK1の活性化が認められた。一方、PDMPにはCD40Lの発現が検出され、抗CD40L抗体により内皮細胞・THP-1におけるPKCおよびMAPKの活性化は抑制された。以上より、高ずり応力によって生成されたPDMPはサイトカインの影響を受けながらCD40Lを発現し、単球および血管内皮細胞における接着分子発現をPKC・MAPK依存性に増強し、これらの細胞間における相互作用に影響を及ぼしていることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Osumi K, et al.: "Development and assessment of enzyme immunoassay for platelet-derived microparticles"Thrombosis and Haemostasis. 85. 326-330 (2001)
• [文献書誌] Nomura S, et al.: "High-shear-stress-induced activation of platelets and microparticles enhances expression of cell adhesion molecules in THP-1 and endothelial cells"Atherosclerosis. 158. 277-287 (2001)
• [文献書誌] Nomura S, et al.: "Effects of Saiko-ka-ryukotsu-borei--to in patients with hyperlipidemia"Phytomecicine. 8. 165-173 (2001)
• [文献書誌] Nomura S: "Function and clinical significance of platelet-derived microparticles"International Journal of Hematology. 74. 397-404 (2001)
• [文献書誌] Omoto S, et al.: "Detection of monocyte-derived microparticles in patients with type II diabetes mellitus"Diabetologia. (in press). (2001)
• [文献書誌] Nomura S, et al.: "Effects of eicosapentaenoic acid on platelet activation markers and cell adhesion molecules in hyperlipidemic patients with type 2 diabetes mellitus"Journal of Diabetes and its Complications. (in press). (2001)