|
循環器領域でのキニン産生系の重要性はカリクレイン過剰発現やキニン受容体ノックアウトマウスで確認されている。ヒトでもACE阻害薬の降圧作用や心血管疾患予後改善作用に局所産生キニンの分解阻害が挙げられている。我々は犬心筋より組織カリクレイン様酵素の精製を行った結果、従来とは異なる新規酵素を精製した。
この新規酵素の病体生化学的な意義を明確にする為、ヒトの心臓および膵臓等に由来するのcDNAライブラリーを用いて新規カリクレイン様酵素の存在の有無を検討した。数種類のヒト組織軽くレインの酵素学的構造上において、重要な共通部分のアミノ酸構成からプライマーを合成し、デジェネラシーの低いプライマーを用いて数種類の組み合わせでPCRを行った。得られたプロダクツをベクターヘライゲーションを行いDNAシークエンスした結果、プライマーの組み合わせは異なるが、膵臓および心臓のライブラリーよりカリクレインのDNAの一部をサブクローニングする事が出来た。ここで得たDNAを用いてcDNAライブラリーのスクリーニングを行うとともに、ヒトの心臓に由するRNAライブラリーを用いた3'、5'RACEをも行った。これにより我々が見出した新規の組織カリクレインがヒト心臓に存在すること、またその構造を明確にすることが出来、ACE阻害薬とアンジオテンシン受容体拮抗薬との相違、特に臓器保護作用におけるキニン増強作用の意義や心血管でのキニン産生系酵素の発現調節など新知見が得られると確信する。
|
