| 研究概要 |
抗TPO結合性多クローン性抗体を添加したwell plateに,精製TPOを吸着し,吸着抗原への患者精製IgG画分の結合を検出する高感度antigen-capture sandwich ELISA法を開発した.精製吸着抗原量を一定化し,これに標識マウスIgG型多クローン性抗TPO抗体を標準抗体としてシステムの定量化を計った.10ng/mlに調製した精製TPOを,マウス抗TPOモノクローナル抗体を吸着したwell plateに段階希釈して添加孵置し,これを2%BSAでblock後,標識抗TPO抗体を加えて結合抗体量を測定し,標準曲線を作成した.
まず同意を得て採取された小児ITP患者血清(急性型37例,慢性型43例)を用いて循環抗TPO抗体のスクリーニング検査を行った.被験血清0.1mlを抗TPO MoAb吸着plastic well plateにtriplicateに添加孵置して洗浄後,ビオチン標識抗ヒトIgGモノクローナル抗体を添加してTPOに結合したIgG抗体をavidin-biotin peroxidase systemでスクリーニング検出した.この結果,急性ITPの3例,慢性ITP4例に,normal+2SD以上のIgG吸着がみとめられた.当該ITP血清について,protein-Aを吸着したセファロースカラムを用いたリガンド=レセプターアフィニティクロマトグラフィーにより,IgG画分を精製した.
この患者血清のIgG画分を用いて,システムに精製TPOを液相添加し,吸収試験を実施して抗TPO抗体の特異性の検討を計画している.さらに抗TPO抗体陽性・陰性血清の,in vitro TPO依存性巨核球血小板造血能に与える影響を検討する.
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