ヒト1番染色体1P36領域における神経芽腫関連がん抑制遺伝子の探求

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13670857
• 研究機関: 千葉県がんセンター
• 研究代表者: 大平 美紀 千葉県がんセンター, 生化学研究部, 研究員 (20311384)
• 研究分担者: 影山 肇 千葉県がんセンター, 生化学研究部, 研究員 (50260253) ; 中川原 章 千葉県がんセンター, 生化学研究部, 部長 (50117181)
• キーワード: 1p36 / 神経芽腫 / ホモ欠失 / ポジショナルクローニング / がん抑制遺伝子

研究概要

小児の腹部腫瘍である神経芽腫の関連遺伝子がヒト1p36領域に存在するといわれている。我々は2種類の神経芽腫細胞株において、1P36のD1S244周辺領域におけるホモ欠失を同定した。欠失領域をカバーする約800kbのPACコンティグを作製し、この領域の遺伝子の同定と、それぞれのがん抑制遺伝子としての可能性についての検討を進めている。
本年度は以下の解析を行った。
1)ホモ欠失領域をカバーする5つのPACクローンのゲノムシーケンシングを行った(理研ゲノムセンター・服部正平博士らのグループ、東大医科研ヒトゲノム解析センター・榊佳之教授らのグループとの共同による)。全長は約500kbであり、現在約85%以上のシーケンスが判明している。このシーケンスを用いて、ブラスト検索等により現在までにこの領域から6つの遺伝子を同定した。これらの遺伝子にはアポトーシスや、ユビキチンープロテアソーム系に関連するものが含まれていた。うち2つについてはデータベース内に部分配列しかなかったため、全長クローニングを行った。またGrail、GENSCAN等による遺伝子予測を行い、計130のEST断片を同定し、さらに遺伝子を検索している。
2)がん抑制遺伝子としての可能性についての検討
上記の6つの遺伝子について神経芽腫におけるがん抑制遺伝子としての可能性について検討した。まず神経芽腫サンプルを用いた遺伝子変異検索をRT-PCR-SSCP法にて行った。塩基置換が数ヵ所みられたが、その頻度は低かった。さらに各遺伝子の神経芽腫での発現を見るため、各種神経芽腫細胞株および患者サンプルのRNAを用いたRT-PCRを行った。この時、比較すべき正常組織が入手困難なためN-myc増幅を伴わない予後良好タイプの神経芽腫と、N-mycが増幅した予後不良タイプの神経芽腫とで発現を半定量的に比較した。その結果少なくとも3つの遺伝子に関して予後不良群における発現が予後良好群に比較して1/3以下に低くなっていた。これら3つの遺伝子の発現の低下が、この領域のメチル化などの影響によるものかどうかについてさらに解析を進めている。
3)ホモ欠失領域のマウスにおけるシンテニー領域をBACクローンにより単離するため、スクリーニングを開始した。

研究成果

• [文献書誌] Shinagawa T, Ohira M, et al.: "Increased susceptibility to tumorigenesis of ski-deficient heterozygous mice"Oncogene. 20. 8100k-8108k (2001)
• [文献書誌] Yang X, Ohira M, et al.: Hum Genet. 109. 526-534 (2001)
• [文献書誌] Ichimiya S, Ohira M, et al.: "Genetic analysis of p73 localized at chromosome 1p36.3 in primary neuroblastomas"Med Pediatr Oncol.. 36. 42-44 (2001)
• [文献書誌] Chen YZ, Ohira M, et al.: "A bac-based sts-content map spanning a 35-mb region of human chromosome 1p35-p36"Geno mics. 74. 55-70 (2001)
• [文献書誌] Takahashi M, Ohira M, et al.: "Identification of the p33NG1-regulated genes which include cyclin B1 and proto-oncogene DEK by using cDNA microarray in a mouse mammary epithelial cell line NMuMG"Cancer Res.. (in press).
• [文献書誌] Iuchi T, Ohira M, et al.: "Identification of the small interstitial deletion at chromosome 1p34-p-35 and its association with poor outcome in oligodendroglial tumors"Genes Chromosomes Cancer.. (in press).