| 研究概要 |
時計遺伝子の本体は転写因子あるいはその機能を修飾する遺伝子であり、転写促進系因子としてCLOCK、BMAL1が、転写抑制系因子としてPER1,CRY1などが知られている。時計遺伝子は概日リズムの振動の発現のみならず、様々な遺伝子の日内変動を直接あるいは他の転写因子を介して駆動していることが知られるようになった。私たちはBmal1のクローニングを初めて報告するとともにそのゲノム構造および発現調節に係わるプロモーター領域の同定を行ってきているが、本研究課題ではBmal1のリズム性発現に関与する転写因子およびプロモーター領域、発現調節様式を解析するとともに、視床下部諸核でリズム性の発現を示す遺伝子の転写解析を行った。
Bmal1プロモーター/ルシフェラーゼコンストラクトおよびその変異体を作成し、ルシフェラーゼアッセイによるプロモーター活性の測定によりスクリーニングを行った。その結果Bmal1の転写はRORα、RORβおよびRORγによって促進を、Rev-Erbβによって抑制を受けること、また促進活性はRORαが一倍高いことを見いだした。またゲルシフトによってこれらの因子は転写開始点近傍にあるRORレスポンスエレメントに結合することから、ROR-レスポンスエレメントを介して直接転写調節を受けることが明らかになった。
次に視床下部に発現しHPA axisに関連するCRHのプロモーターを解析したところ、RORレスポンスエレメント様配列が存在すること、RORα、RORβによって負に制御されている可能性が示された。
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