KIT,FLT3を介する細胞増殖・生存・腫瘍化機構の解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671063
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 倉恒 弘彦 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (50195533)
• 研究分担者: 松村 到 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (00294083) ; 待井 隆志 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (50124780) ; 金倉 譲 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (20177489) ; 柴山 浩彦 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 水木 満佐央 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80283761)
• キーワード: KIT / PI3-K / STI571 / AG1296

研究概要

幹細胞増殖因子(SCF)受容体のKITには膜直下領域の変異(KIT^<G559>)とキナーゼ領域の変異(KIT^<V814>)が報告されている。本研究では、活性型変異KITによる細胞増殖機構とチロシンキナーゼ阻害剤がその増殖に及ぼす影響について解析を行った。
野生型KIT(KIT^<WT>及びKIT^<V814>の細胞内の22個のチロシン(Y)残基を一つずつフェニルアラニンに置換した変異体を作成し、IL-3依存性細胞株Ba/F3に導入した。KIT^<V814>はBa/F3にIL-3非依存性増殖をもたらしたが、この増殖はY719変異によりほぼ完全に阻害された。一方、SCFによるKIT^<WT>を介した増殖はY719変異によりほとんど影響されなかった。このY719変異体を導入したBa/F3細胞ではKIT^<V814>によるPI3-Kの活性化が阻害されており、KIT^<V814>による増殖にはPI3-Kが強く関与すると考えられた。次に、作用点の異なる2種のチロシンキナーゼ阻害剤(ATP結合を阻害するSTI571及びtyrophostin系のAG1296)がKIT依存性増殖に及ぼす影響について解析を行った。10μMの濃度のSTI571、AG1296は共にSCFによる野生型KIT、のチロシンリン酸化、KIT^<G559>の自己チロシンリン酸化を強く抑制したが、KIT^<V814>の自己チロシンリン酸化にはほとんど影響しなかった。この結果に一致して、同濃度で使用したSTI571、AG1296はSCFによる野生型KIT依存性、KIT^<G559>依存性のBa/F3細胞の増殖を強く阻害したが、KIT^<V814>依存性の増殖はほとんど抑制しなかった。これらの結果から、2種の変異型KITには2量体形成などにおける活性化機構の質的な違いに起因する薬剤反応性の差があると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Fukuda, M, et al.: "Effect of transforming growth factor-beta 1 on the cell growth and Epstein-Barr virus reactivation in EBV-infected epithelial cell lines"Virology. 288. 109-118 (2001)
• [文献書誌] Nojima, J, et al.: "Anti-prothrombin antibodies combined with lupus anti-coagulant activity is an essential risk factor for venous thromboembolism in patients with systemic lupus erythematosus"Br. J. Haematol. 114. 647-654 (2001)
• [文献書誌] Kawasaki, A., et al.: "Down-regulation of an AIM-1 kinase couples with megakaryocytic polyploidization of human hematopoietic cells"J. Cell. Biol.. 152. 275-288 (2001)
• [文献書誌] Tanaka, H., et al.: "E2F-1 and c-Myc potentiate apoptosis through inhibition NF-kB activity that facilitates MnSOD-Mediated ROS elimination"Molecular Cell. (in press).
• [文献書誌] Ueda, S., et al.: "Critical roles of c-kit tyrosine residues 567 and 719 in stem cell cell factor-induced chemotaxis : contribution of src family kinase and PI3-kinase on calcium mobilization and cell migration"Blood. (in press).
• [文献書誌] Sonoyama, J., et al.: "Functional cooperation among Ras, STAT5, and PI3-K is required for full oncogenic activities of BCR/ABL in K562 cells"J. Biol. Chem.. (in press).