核受容体によるサイトカインの接着分子の発現制御の特異性とその分子機構

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671153
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 笠山 宗正 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (10240839)
• キーワード: 核受容体 / サイトカイン / 接着分子 / IL-6 / VCAM-1 / PPAR / 血管内皮細胞 / NF-κB

研究概要

ヒト臍帯静脈由来内皮細胞(HUVEC)を種々の核受容体リガンドで処理後TNF-αで刺激したときの各種接着分子の発現量をwhole cell ELISAにより測定した。標的遺伝子のプロモータ領域に対する転写因子の結合はEMSAにより解析した。さらに、ウシ大動脈由来内皮細胞(BAEC)に種々のレポーター遺伝子を導入し、標的遺伝子の転写活性に対する核受容体リガンドの作用について解析した。その結果、progesteroneは血管内皮細胞におけるTNF-α誘導性VCAM-1発現を遺伝子の転写レベルで抑制し、これはTNF-α刺激後のNF-κBの核内移行後にVCAM-1遺伝子の上流プロモータ領域へのNF-κBの結合を阻害することによってもたらされることを証明した。一方、同じprogesterone receptorのリガンドであるmedroxyprogesteroneにはこの作用が認められず、VCAM-1の遺伝子発現抑制作用にはリガンド特異性が認められることが判明した。また、PPARαのリガンドであるfenofibrate(Feno)が同じ機構でVCAM-1発現を抑制すること、同様にNF-κB誘導性遺伝子であるIL-6遺伝子の転写に対してもFenoが抑制作用を示すことを明らかにした。一方、GRのリガンドであるdexamethasone(Dex)はIL-6遺伝子のみの転写を抑制しVCAM-1遺伝子の転写活性に対しては抑制作用を示さないこと、DexはIL-6遺伝子プロモータに対するNF-κBの結合のみを阻害しVCAM-1遺伝子プロモータに対するNF-κBの結合は阻害しないことが明らかとなった。すなわち、同じようにNF-κBにより転写促進される遺伝子であっても、核受容体による転写抑制作用には標的遺伝子により特異性があることが判明した。

研究成果

• [文献書誌] Xu, X., OtsukiM., Saito, H., Sumitani, S., Yamamoto, H., Asanuma, N., Kouhara, H., Kasayama, S: "PPARα and GR differentially down-regulate the expression of nuclear factor-κB responsive genes in vascular endothelial cells"Endocrinology. 142. 3332-3339 (2001)
• [文献書誌] Otsuki, M., Saito, H., Xu, X., Sumitani, S., Kouhara, H., Kishimoto, T., Kasaama, S: "Progesterone, but not medroxyprogesterone, inhibits vascular cell adhesion molecule-1 expression in human vascular endothelial cells"Arteriocler. Thromb. Vasc. Biol. 21. 243-248 (2001)
• [文献書誌] Hirose, T., Kurebayashi, S., Kasayama, S: "Antiplatelet agent cilostazol potentiates adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells"Atherosclerosis. 158. 19-22 (2001)
• [文献書誌] Otsuki, M., Saito, H., Xu, X., Sumitani, S., Kouhara, H., Kurabayashi, M., Kasayama, S: "Cilostazol respresses vascular cell adhesion molecule-1 gene transcription via inhibiting NF-κB binding to its recognition sequence"Atherosclerosis. 158. 121-128 (2001)
• [文献書誌] Kurebayashi, S., Sumitani, S., Kasayama, A., Jetten, A.M, Hirose, T: "TNF-α inhibits 3T3-L1 adipocyte differentiation without downregulating the expression of C/EBPβandδ"Endocrine J. 48. 249-254 (2001)
• [文献書誌] Sumitani, S., Goya., Testa, J.R., Kouhama, H., Kasayama, S: "Aktl and Akt2 differently regulate muscle creative kinase and myogenin gene transcription in insulin-induced differentiation of C2C12 myoblasts"Endocrrinology. 143. 820-828 (2002)