コルチゾル産生副腎皮質腺腫(クッシング症候群)の発症機序に関する研究

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671226
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 舟橋 啓臣 名古屋大学, 医学部・附属病院, 講師 (50135357)
• 研究分担者: 今井 常夫 名古屋大学, 医学部・附属病院, 講師 (80252245) ; 神部 福司 名古屋大学, 環境医学研究所, 助教授 (00211871) ; 妹尾 久雄 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (40135380)
• キーワード: クッシング症候群 / コルチゾル産生副腎皮質腺腫 / RDA / グルタチオン-S-トランスフェラーゼ / Diminuto / ACTH受容体遺伝子

研究概要

コルチゾル産生副腎皮質腺腫(CPA)の発症機序を分子生物学的手法により解明することを目的とし、RDA(Representational Difference Analysis)法を用いて、CPAにおいて特異的に発現増強あるいは減弱している遺伝子群を同定し、その機能を明らかにすることによりCPAの発症機序を明らかにしている。
CPAとそれに隣接する正常副腎からRNAを抽出、mRNAを精製後、逆転写酵素を用いてcDNAを作成した。このcDNAを二重鎖DNAにした後、制限酵素DpnIIにより消化し、約300bpのフラグメントとし、アダプターを付け、CPA、正常副腎から得られたcDNAのそれぞれをPCRにより増幅しアンブリコンを作成した。この両者のアンブリコンを用いてサブトラクションPCR(Representational Difference Analysis=RDA)を行い、CPAに特異的に発現しているcDNA群をクローニングした。その結果、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST-A1)及びKIAA0018遺伝子が同定された。ノーザン解析によりこれらmRNAの発現が、CPAに強く認められ、正常副腎では殆ど発現が認められなかった。GST-A1は、ヒト副腎腫瘍由来のH295細胞においても発現が認められ、この活性をエタクリン酸で阻害すると、細胞増殖が強く抑制さた。従って、CPAにおけるGST-A1の過剰発現は、腫瘍細胞の増殖に関与していることが明らかにされた。一方、KIAA0018 cDNAの全塩基配列法を決定し、このcDNAがヒトDiminutoホモログであることを確認した。Diminutoは、植物の生長を促すステロイドホルモン合成に関わる酵素としてクローニングされると共に、本年ドイツの研究者達により、神経細胞のアポトーシスを抑制することが報告された。従って、CPAにおけるヒトDiminuto遺伝子の過剰発現は、ステロイドホルモンの合成、腫瘍増殖に関わっている可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Imai T, Sarkar D, Shibata A, Funahashi H, et al.: "Overexpression of glutathione S-transferase A1 (GSTA1) in benign adrenocortical adenomas from patients with Cushing's syndrome"Journal Clnical Endocrinology and Metabolism. 86(4). 1653-1659 (2001)
• [文献書誌] Sarkar D, Imai T, Kambe F, et al., Funahashi H, Seo H.: "Expression of adrenocorticotropin receptor gene in adrenocortical adenomas from patients with Cushing's syndrome : Possible contribution for the autonomous production of cortisol"Annals of Surgery. 234(1). 85-91 (2001)
• [文献書誌] Sarkar D, Imai T, Kambe F, Shibata A, Ohmori S, Siddia A, Hayasaka S, Funahashi H, Seo H.: "The human homolog of Diminuto/Dwarfl gene(hDiminuto) : A novel ACTH-Responsive gene overexpressed in benign cortisol-producing adrenocortical adenomas"Journal Clnical Endocrinology and Metabolism. 86(11). 5130-5137 (2001)
• [文献書誌] Shibata A, Hayashi Y, Imai T, Funahashi H, Nakao A, Seo H: "Somatic gene alteration of AIB1 gene in patients with breast cancer"Endocrine Journal. 48(2). 199-204 (2001)
• [文献書誌] Funahashi H, Imai T, Mase T, Sekiya M, et al.: "Seaweed prevents breast cancer?"Japanese Journal of Cancer Research. 92(5). 483-487 (2001)