異種間(ラット→マウス)における免疫寛容誘導の試み

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671242
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 富田 幸裕 九州大学, 大学院・医学研究院, 講師 (90180174)
• 研究分担者: 西田 誉浩 九州大学, 医学部・附属病院, 助手 (50284500)
• キーワード: cyclophosphamide / Busulfan / 免疫寛容 / 抗α-Gal抗体 / α-Galノックアウトマウス / 異種移植 / 超急性拒絶反応 / B細胞での免疫寛容

研究概要

我々はこれまでcyclophosphamideを用いたキメリズムに基づく免疫寛容の誘導系について1985年より実験を行い、50報以上の報告を行ってきた。マウスにおいて、MHC一致、マイナー抗原不一致の組み合わせにおいて、ドナー脾細胞1x10^8投与後cyclophosphamide200mg/kg投与するという簡単なプロトコールにて、永久的なキメリズムと皮膚移植片の永久生着が認められる。また、cyclophosphamide200mg/kg投与に加え、Busulfan25mg/kg投与後、ドナー骨髄細胞1x10^8個投与することにより、MHC不一致の組み合わせにおいても永久的なキメリズムと皮膚移植片のキメリズムが得られ、ドナー特異的免疫寛容が誘導できることを報告した。(J.Immunol.1999)。将来このプロトコールを用いてのブタからヒトヘの心移植を視野に入れ、次の実験を行っている。抗α-Gal抗体はヒトブタ間での異種移植における超急性拒絶反応を引き起こす原因となる抗体として知られているが、この抗体を産生するB細胞における免疫寛容の誘導を目的としてα-Galノックアウトマウスを用いた実験を行っている。MHC不一致の組み合わせにおいて、α-GalK.O.マウスにWTマウスの脾細胞を投与すると抗α-Gal抗体の上昇を認め、心移植片は超急性拒絶反応により拒絶されるが、脾細胞を投与後にcyclophosphamide200mg/kg投与することにより抗α-Gal抗体は消失し、B細胞における免疫寛容が誘導された。更に心移植片における超急性拒絶反応は認めなかった。今後更に実験を行い、B細胞での免疫寛容の誘導におけるメカニズムを解析していく。また、ドナーをF344ラット、レシピエントをB10マウスを用い、異種移植の実験を行っている。day-2にドナー脾細胞1x10^8投与、cyclophosphamide200mg/kg及びBusulfan30mg/kgをday0に投与し、day1にドナー骨髄細胞6x10^7個投与することによりマイクロキメリズム及び皮膚移植片の生着延長を認めている。今後更に皮膚移植片の永久生着ができるプロトコールを開発していく。

研究成果

• [文献書誌] Tomita, Y., Q-W.Zhang, I.Shimizu, T.Iwai et al.: "Fractionated dosing of cyclophosphamide prevents leucopenic side effects in cyclophosphamide-induced tolerance"Surgery Today. (In press).
• [文献書誌] Shimizu, I., Y.Tomita, T.Iwai, G.Matsuzaki, K.Nomoto et al.: "Different expressions of Ly-49 receptors on mouse NK and NK cells"Immunobiology. 204. 466-476 (2001)
• [文献書誌] Zhang, Q-W., Y.Tomita, G.Matsuzaki, S.Okano, I.Shimizu: "Induction of heart allograft tolerance without development of post-transplant cardiac allograft vasculopathy in chimerism-based drug-induced tolerance"Transplantation. (In press).
• [文献書誌] Zhang, Q-W., Y.Tomita, G.Matsuzaki, T.Uchida, et al.: "Chronic rejection of H-2 matched heart allografts : Early emergence of vasculopathy, alloantibody and accumulation of IFN-g and IL-10 mRNA"Transplantation. 14. 143-152 (2001)
• [文献書誌] Tomita, Y., Q-W.Zhang, T.Uchida, M.Yoshikawa, U.Shimizu: "A technique of cervical aortic graft transplantation in mice"J Heart Lung Transplantation. 20. 699-702 (2001)
• [文献書誌] Tomita, Y., Yoshikawa, M., Q-W.Zhang, I.Shimizu, S.Okano et al.: "Induction of mixed chimerism and permanent skin graft tolerance by additional myelosuppressive treatments across fully H-2 mismatched barriers in mice primed with・・・"J. Immunology. 165. 34-41 (2000)