| 研究概要 |
ブタからヒトへの異種移植の可能性を追求することを目的として、ブタのMHC(SLA)クラスI領域の塩基配列決定を行い、ヒトのMHCクラスI領域との遺伝子構成の差異を明らかにするとともに、SLA遺伝子の多型性を簡便、迅速に解析するためのDNAタイピング法の確立を試みた。
ヒトとブタのMHCクラスI領域の遺伝子構成を比較するために、昨年度に引き続いて、SLAクラスI領域内の古典的クラスI遺伝子群と非古典的クラスI遺伝子群の両クラスター間約400kbの領域に位置する3個のBACクローンの塩基配列を決定し、この領域の遺伝子構成や特徴について解析を行った。その結果、昨年度塩基配列決定した145kbの塩基配列情報と合わせると、この400kbの領域には、合計19個のヒトと同様の非MHC遺伝子が見出され、MHC遺伝子を含まない領域ではヒトとブタ間で高度に保存されていた。さらに、ヒトではHLA-EからHLA-30遺伝子間に相当するHSR1遺伝子のテロメア側の領域(約200kb)が、ブタでは欠損していた。
また、SLAクラスI,クラスII遺伝子の5遺伝子座について、PCR-SSP法とPCR-RFLP法による簡便なDNAタイピング法の確立を試みた。クラウンミニブタに見出されたSLAクラスI遺伝子(SLA-1,-2,-3)の5アリルとSLAクラスII遺伝子(DRB1)の2アリルの第2または第3エキソンを特異的に増幅する11セットのプライマーを設計し、増幅の有無により、SLAタイプを迅速に判定することができた。また、DQB遺伝子については、RsaIを用いたPCR-RFLP法により、2アリルを判別することができた。これらの簡便なSLA-DNAタイピング法は、SLAクラスI, IIホモ接合体のブタの迅速な選別に有効であり、現在この方法によるSLA遺伝子純系クラウンミニブタの作出を行っている。
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