| 研究課題/領域番号 |
13671346
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
三澤 健之 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (50260956)
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| 研究分担者 |
鈴木 聡 日本医科大学, 第2生化学講座, 講師 (70246940)
衛藤 義勝 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (50056909)
武山 浩 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (70236511)
島田 隆 日本医科大学, 第2生化学講座, 教授 (20125074)
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| キーワード | 転移性肝癌遺残 / fibrin glue / adenovirus vector / 癌抑制遺伝子 / 遺伝子治療 |
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| 研究概要 |
1. (in vitro)Fibrin glueと1x10^6pfuのAxLacZCAGを混和したもの(以下fibrin glue/LacZ)を単層培養したラット大腸癌細胞株であるRCN9に塗布し、48時間後にX-Gal染色を施行した。ほぼ100%の細胞において導入が確認された。
2. (ラット肝臓への導入実験)ラットの肝臓を部分切除し、肝切離面に1x10^8pfuのfibrin glue/LacZを塗布し48時間放置。対照のラットには同様にしてPBSに1x10^8pfuのAdCAZLacZを塗布した。48時間後、犠牲死させ、肝切離部分の含まれた肝臓、正常部肝臓、小腸、腎臓、脾臓を摘出した。fibrin glue/LacZを噴霧した肝臓にはX-Gal染色、β-Gal測定を、その他の臓器ではβ-Gal測定のみを施行した。結果は、fibrin glue/LacZでは肝切離面に選択的に遺伝子導入が確認され、PBS/LacZでは非特異的にすべての臓器への導入が確認された。
3. (転移性肝癌モデルの作製)8週齢、雄、F344ラットの肝臓被膜下に1x10^7個のラット大腸癌細胞株RCN9を接種する。10日後に、径7mmの腫瘍が作製された。
4. (転移性肝癌への導入実験)3の方法で作製した腫瘍を局所切除し細切し1辺1mm各の腫瘍片を作製する。これをふたたび創部に戻しこの上からfibrin glue/LacZを噴霧し腫瘍を切除面に固定する。48時間後、ラットを犠牲死させ、方法2に準じた各臓器を摘出。fibrin glue/LacZを噴霧した肝臓にはX-Gal染色、β-Gal測定を、その他の臓器ではβ-Gal測定のみを施行した。結果は、fibrin glue/LacZでは肝切離面に選択的に遺伝子導入が確認され、PBS/LacZでは非特異的にすべての臓器への導入が確認された。
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