SAGE法を利用したグリオーマ特異的遺伝子の単離と迅速遺伝子診断への応用

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671465
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 戸田 正博 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
• 研究分担者: 河瀬 斌 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (40095592) ; 河上 裕 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50161287)
• キーワード: グリオーマ / 遺伝子診断 / SAGE / 癌 / 特異的遺伝子 / 中枢神経系

研究概要

近年、未知の分子を含む遺伝子発現量を定量的にかつ大量に解析する方法として、SAGE法(Serial Analysis of Gene Expression)が開発された。本研究では、グリオーマの遺伝子診断法の開発を目的として、SAGE法を中心にデータベースを利用した体系的な遺伝子発現解析によるグリオーマ特異抗原分子の単離、同定を行なった。SAGE法は遺伝子と一対一に対応すると考えられる約10bpの塩基配列をtagとして、大量に塩基配列解析を行なうものであり、定量的な遺伝子発現解析が可能である。そこでNCI(National Cancer Institute)データベース上に公開されているグリオーマをはじめとする各種癌および正常組織のSAGE解析による遺伝子発現解析プロファイルを利用して、グリオーマ特異的な発現を示すEST(expressed sequence tag)の選出を行った。さらに現在我々はGenechipを用いた正常脳組織とグリオーマ組織における体系的な遺伝子発現解析を行っており、それら選出されたESTの発現特異性を確認する予定である。一方、グリオーマcDNA libraryはヒトグリオーマ細胞株、ヒトグリオーマ組織からそれぞれmRNAを調整後、oligo(dT)primerによりcDNAを合成し、ファージベクターλZAP IIに組み込んで作製した。今後グリオーマにおける発現特異性が確認されたEST fragmentをプローブとして、cDNA全長をクローニングする予定である。

研究成果

• [文献書誌] Toda M, et al: "Isolation of new genes coding for human glioma antigens by SEREX (Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)"Proc. Am. Assoc. Cancer Res.. 42. 156 (2001)
• [文献書誌] Endo T, Toda M, et al: "Therapeutic efficacy of intratumoral injection and intrasplenic injection with a mutant HSV for the treatment of liver metastasis of colon cancer"Proc. Am. Assoc. Cancer Res.. 42. 816-817 (2001)
• [文献書誌] Iizuka Y, Toda M, et al: "A simple and effective therapeutic approach for the induction of antitumor immunity with replication-conditional mutant HSV"Proc. Am. Assoc. Cancer Res.. 42. 817 (2001)
• [文献書誌] Toda M, et al: "Combination suicide / cytokine gene therapy as adjuvants to a defective herpes simplex virus-based cancer vaccine"Gene Ther. 8. 332-339 (2001)
• [文献書誌] Toda M, et al: "Expression of the neural RNA-binding protein musashil in human gliomas"Glia. 34. 1-7 (2001)
• [文献書誌] Ishii K, Toda M, et al: "Increase of oligodendrocyte progenitor cells after spinal cord injury"J. Neurosci. Res.. 65. 500-507 (2001)