亜性グリオーマにおけるp130遺伝子の機能解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13671475
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 河本 圭司 関西医科大学, 医学部, 教授 (70077741)
• 研究分担者: 笠井 治文 関西医科大学, 医学部, 助手 (80268341) ; 沼 義博 関西医科大学, 医学部, 講師 (40208278) ; 土田 高宏 関西医科大学, 医学部, 講師 (10181249) ; 須川 典亮 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (50244596)
• キーワード: glioma / p130 / transfection / cyclinB1 / cyclinD1

研究概要

a)グリオーマ細胞株(U373MG, U251MG, T98G, GI-1)を用いて細胞周期の解析
(1)FCMを用いた細胞周期の解析(沼、笠井)
FlTC標識cyclin A, B1,D1,Eとpropidium iodideによるDNAヒストグラムより各細胞周期別発現を測定する。
グリオーマ細胞株ではサイクリンA, B1,D1の発現をみる、B1,D1に発現がみられた。また、サイクリンB1は、細胞周期のS G2Mに発現し、D1は、Go1に発現していることが判明した。
(2)LSCを用いた細胞周期の解析(沼、河本)
LSCではFCMと同様の結果が得られた。
(b)グリオーマ株にp130遺伝子導入を機能解析
(1)p130遺伝子発現U-87MGの作成(須川)
p130cDNAをBCMGSneoにサブクローンし、ついでこのBCMGSneo/p130をmalignant glioma cell lineであるU-87MGにLipofectAMINEを使用して導入、G418にてセレクションを実施、p130遺伝子発現U-87MGを作成することができた。
p130のoncogeneについて、6ヶ月にわたりplasmidを作製することに成功した。gene transfectionの技術も取得しており、p130をu87MG細胞transfectionすることも可能になった。
今後mutant glioma(LN-319)について悪性脳腫瘍の増殖を抑制できるかどうか、サイクリンの発現はどうか、などについて検討する段階になった。