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Placental leucine aminopeptidase(P-LAP)は妊娠中のオキシトシナーゼの本体である。我々は既にこのゲノムクローニングに成功しているが、本年度には主に絨毛細胞におけるP-LAPの転写制御因子の同定を行った。絨毛細胞モデルとして用いたBeWo細胞において、-297〜+49の領域がP-LAPの転写に重要であり、この領域には4ケ所の蛋白結合領域が存在するが、中でも-214〜-183bpの領域が最も転写活性を高めている事を解明した。更に、この領域には絨毛性ゴナドトロピンや胎盤性ラクトーゲンの遺伝子発現において重要であることが報告されている転写因子AP-2α、AP-2γが結合し、変異導入実験により、P-LAP転写に機能的にも重要であることを突きとめた。更に、この領域にはIkarosという転写因子が結合しAP-2と協調的に転写括性を上昇させていることを発見したが、Ikarosはこれまでリンパ球の分化因子としての報告しかなく、絨毛細胞において転写に関与していたことは世界で最初の報告である。また、P-LAPは分化した絨毛細胞に発現することを我々は既に免疫染色で報告しているが、このことより絨毛細胞の分化刺激剤として知られるcAMPを絨毛細胞に添加したところ、P-LAPの発現が亢進することをウェスタンブロット法、及びRT-PCRによって見い出している。同時にP-LAPの類縁酵素であるAPAが絨毛細胞においてプロゲステロン刺激により発現を増加させることも、RNase protection法、FACS解析によって認めている。次年度に向け、羊膜由来細胞のWISHにおいて、P-LAPが発現していることを、蛋白、遺伝子、転写レベルで確認している。
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