抗細菌性タンパク遺伝子導入によるin vitroでの細菌感染抑制効果

2002 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 13671907
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 形態系基礎歯科学
• 研究機関: 北海道医療大学
• 研究代表者: 賀来 亨 北海道医療大学, 歯学部, 教授 (60133253)
• 研究分担者: 荒川 俊哉 北海道医療大学, 歯学部, 講師 (40306254) ; 中島 啓介 北海道医療大学, 歯学部, 助教授 (80227785) ; 安彦 善裕 北海道医療大学, 歯学部, 助教授 (90260819)
• 研究期間 (年度): 2001 – 2002
• キーワード: ディフェンシン / 遺伝子導入 / 細菌感染 / 歯周炎 / マクロファージ

研究概要

βディフェンシ、LL37、hCAP-18は口腔上皮での細菌感染防御機構に大きく関与していることが示唆されてきているが、これらのタンパクの抗菌作用の強弱については全く明らかになっていない。本研究では、マクロファージ細胞株J774.1にβディフェンシン-1と-2、LL37、hCAP-18の遺伝子を導入することによりこれらのタンパクを発現させActinobacillus actinomycetemcomitance (Aa)の感染率からこれらのタンパク発現の細胞への感染抑制効果を明らかにすることを目的とした。
ヒトβディフェンシン1および2の全長のcDNAをHigh federityの耐熱性DNA polymeraseを用いたPCR法により増幅し、Hygromycin耐性プラスミドpcDNA1.1につなぎ込み、βディフェンシン蛋白発現ベクターを作製した。この発現Vectorをlipofection法にてJ774.1へ遺伝子導入し、RT-PCR法によってヒトβディフェンシン1および2mRNAの発現について検索したところ、これらの発現が確認された(hBD-1/J774.1, hBD-2/J774.1)。この確立された細胞株(hBD-1/J774.1, hBD-2/J774.1)を用いて、遺伝子導入していない細胞株J774.1をコントロールとして、Aaの感染抑制効果について、standard quantitative assay MTT assay, quantitative DNA fragmentation assayにより検索した。hBD-1/J774.1, hBD-2/J774.1いずれの細胞でもJ774.1よりもAa菌感染による細胞死率が低下しており、hBD-1、hBD-2遺伝子導入により感染抵抗性の向上が確認された。

研究成果

• [文献書誌] Abiko Y, Jinbu Y, Noguchi T, Nishimura M, Kusano K, Amaratunga P, Shibata T, Kaku T: "Upregulation of human beta-defensin 2 peptide expression in oral lichen planus, leukoplakia and candidiasis. An Immunohistochemical study"Pathol.Res.Pract.. 198. 537-542 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ito Y, Abiko Y, Tanaka Y, Rahemtulia F, Kaku T: "mmunohistochemivcal localization of large chondroitin sulfate proteoglycan in odontogenic tumor"Med Electron Microsc. 35. 173-177 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Koyama T, Nakade O, Takada Y, Kaku T, et al.: "Melatonin pharmacologic dose increase bone mass by suppressing resorption through down-regulation of the RANKL-mediated osteoclast formation and activation"J Bone Miner Res. 17. 1219-1229 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Abiko Y, Nishimura M, Kusano K, Nakashima K, Okumura K, Arakawa T, Takuma T, Mizoguchi I, Kaku T: "Expression of MIP-3α/CCL20, a macrophage inflammatory protein in oral squamous cell carcinoma"Archiv Oral Biol. (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Suraweera, AK, Nishimura, M, Arakawa, T, Takuma, T, Mizoguchi, I, Kaku, T: "Differential expression of human beta-defensin 2 in keratinized and non-keratinized oral epithelial lesions; immunohistochemistry and in situ hybridization"Virchows Arch.. 438. 248-253 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Nishimura, M, Rahemtulla, F, Mizoguchi, I, Kaku, T: "Immunohistochemical localization of large chondroitin sulphate proteoglycan in porcine gingival epithelia"European Journal of Morphology. 39. 99-104 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Liu, F, Abiko, Y, Nishimura, M, Kusano, K, Shi, S, Kaku, T: "Expression of inflammatory cytokines and beta-defensin 1 mRNAs in porcine epithelial rests of Malassez in vitro"Med Electron Microse.. 34. 174-178 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Murata, M, Ito, Y, Taira, T, Nishimura, M, Arisue, M, Inoue, T, Shimono, M, Kuboki, Y, Kaku, T: "Immunohistochemical localization of amelogenin in human odontogenic tumors, using a polyclonal antibody against bovine amelogenin"Med Electron Microsc.. 34. 185-189 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hamaya, M, Mizoguchi, M, Sakakura, Y, Yajima, T, Abiko, Y: "Cell death of osteocytes occurs in rat alveolar bone during experimental tooth movement"Calcif Tissue Int.. 31. 117-126 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Koyama, Y, Nakade, O, Takada, Y, Kaku, T, Lau, WK-H: "Melatonin at pharmacologic dose increase bone mass by suppressing resorption through down-regulation of the RANKL-mediated osteoclast formation and activation"J Bone Miner Res.. 17. 1219-1229 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Jinbu, Y, Noguchi, T, Nishimura, M, Kusano, K, Amaratumga, P, Shibata, T, Kaku, T: "Upregulation of human beta-defensin 2 peptide expression in oral lichen planus, leukoplakia and candidiasis"Pathology. 198. 537-542 (2002)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Nishimura, M, Kusano, K, Nakashima, K, Okumura, K, Arakawa, T, Takuma, T, Mizoguchi, I, Kaku, T: "Expression of MIP-3Eo/CCL20, a macrophage inflammatory protein in oral squamous cell carcinoma"Archives of Oral Biol.. 48. 171-175 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Abiko, Y, Nishimura, M, Kusano, K, Yamazaki, M, Arakawa, T, Takuma, T, Kaku, T: "Upregulated expression of human E* defensin-1 and -3 mRNA differentiation of keratinocyte immortalized cell lines, HaCaT and PHK16-0b"Journal Dermatol Science. 31. 225-228 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より