| 研究概要 |
1.前年度に引き続き、細胞周期の進行における酪酸添加の影響をJurkat細胞を用いWB法にて経時的に解析した。高濃度酪酸添加24h後、G1初期のCyclin D3の発現低下が認められたがCyclin D1及びD2,更にサイクリン依存性キナーゼCdk4及びCdk6の発現に変化は認められなかった。また、Cdk4及びCdk6の特異的阻害剤であるp16及びp18の発現増加も認められなかった。一方、G1→S期移行期に活性化するCyclin E及びS期に活性化するCyclin Aに対しては、酪酸添加により経時的な減少が認められ、更にそれらの依存性キナーゼであるCdk2の発現低下も経時的に認められた。Cdk-サイクリン複合体の阻害剤であるp21^<CIP1/WAF1>及びp27^<KIP1>の発現変化はJurkat細胞では認められなかったが、HelaやKB細胞では高濃度酪酸添加により発現増強が認められた。酪酸はまたG2→M期移行期に活性化するCyclin A及びCyclin Bの発現を経時的に低下したが、それらの依存性キナーゼであるCdc2に対しては影響を示さなかった。
2.低濃度(細胞増殖)及び高濃度(アポトーシス)酪酸添加における、Bcl-2及びFasの動向をフローサイトメトリーにて解析した。低濃度酪酸添加は、Bcl-2及びFasの発現に影響を及ぼさなかったが、高濃度酪酸添加は、Fasの発現に影響を与えなかったもののBcl-2の発現を著しく抑制した。
3.低濃度酪酸処理群と高濃度酪酸処理群との間における、T細胞中のアポトーシス関連遺伝子並びに細胞周期関連遺伝子発現の増減をDNAマイクロアレイを用いて比較検討した。高濃度酪酸刺激によりBax, Bad, Bakの亢進、Bcl-2の低下、ERKの低下やJNKの亢進、抗酸化作用に働くグルタチオンの低下、Caspase-3,-6,-7,-8,-9酵素群の活性化が認められた。
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